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發光免疫分析試劑是指利用特異的抗原抗體反應等生物學原理，利用發光信號來進行檢測的一類試劑。主要包括化學發光（酶促，非酶促），電化學發光和時間分辨熒光等法。
該指導原則主要適用于用發光分析技術對蛋白質等被測物質進行檢測的第三類試劑生產及質量控制。第二類試劑的生產及質量控制可參考該指導原則執行，國家食品藥品監督管理部門將依據科學技術發展的需要，適時組織修訂。
一、基本原則
（一）研制、生產用的各種原料、輔料應當制定相應的質量指標，并應符合有關法規的要求。
（二）診斷試劑的生產必須按《藥品生產和質量管理規范》及（體外診斷試劑生產實施細則）組織生產；企業應具備相應的專業技術人員，相適應的儀器設備和生產環境。
（三）診斷試劑的研制應當按照科學、規范的原則組織研發，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理。
（四）研制生產過程中所用的材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。
（五）生產和質量控制總體目標應保證產品使用安全，質量穩定，工藝可控，使用有效。
二、輔料質量控制
該部分應列出主要原材料質量控制要點，關鍵原材料，如抗原，抗體等應注明來源，性質，質控指標等，生物原料應保證其生物安全。
（一）主要生物原料
與生產的產品質量zui密切相關的生物原料包括各種活性抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被微孔反應板、標記相關標記物及中和反應用抗原、或進行校準品配置等。一般按工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗，以保證其達到規定的質量要求。原料供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料的供應商有變更，必須進行原料驗證，并進行申報。常規檢驗項目一般包括：
1、外觀
肉眼觀察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物，不得渾濁，不得有搖不散的沉淀；或者為凍干品。白色粉末，不含有其他顏色的雜質；特殊生物原料應具備相應外觀標準。
2、純度和分子量
主要通過SDS-PAGE電泳進行檢測，根據所檢測生物原料的分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進行電泳。一般情況下，每個電泳道加樣量為2?10 ?g，同時用已知分子量標準蛋白質作參照，采用適宜的電泳電流、電壓和電泳時間；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍R-250染色。應該顯示為正確的條帶，純度應達到要求。
3、蛋白濃度
蛋白濃度可用生理鹽水稀釋，用紫外分光光度計在波長280nm處檢測出吸光值，計算出蛋白濃度,或采用其它適宜方法進行測定,應符合相應規定的要求。
4、效價
效價的測定一般根據蛋白含量測定結果通過倍比稀釋法測定。效價應達到規定的要求。
5、功能性實驗
功能性實驗是指該生物原料用于相應的試劑盒試劑實際生產中的情況，一般考查該原料使用后的試劑盒的靈敏度、特異性和穩定性等，并比較和以前批號原料的相關性。
（二）生物輔料
生物輔料指的是在生產過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料、主要包括牛血清、羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質量標準應符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質控標準》上規定的標準要求，并且要適合于本企業的生產。
1、牛血清或羊血清
外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體,無溶血或異物。
無菌試驗：將血清直接放到37℃培養7天，放在明亮處觀察, 不得出現渾濁。
總蛋白含量：用雙縮脲方法來測定，標準為不小于32mg/ml。
球蛋白含量：取待測血清1ml，加入0.85％的NaCl溶液。加入飽和硫酸銨1ml，置4℃，2小時，8000rpm離心10分鐘，棄上清。沉淀溶于0.85％NaC1溶液至1ml，用Lowry方法測定蛋白含量，不能大于2mg/ml。
功能性實驗：10％血清稀釋液作為樣本進行測定，不得出現非特異性反應。
2、牛血清白蛋白
外觀：應為淺黃色凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見的其他雜質顆粒。
溶解性：將牛血清白蛋白配成10％溶液，溶解時間應不大于15分鐘。1％水溶液的pH值：6.5?7.1；1％水溶液OD403值：＜0.15。
總蛋白含量：用雙縮脈方法來測定，質量標準為≥95％。
硫酸銨含量：納氏試劑法測定，通過用標準硫酸銨曲線可查出硫酸銨含量，其標準為≤0.1%。
尿素含量：采用二乙酸一肟法測定，通過用標準尿素曲線可查出尿素含量，其標準為≤0.1%。
總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法。其標準為95％以上。
BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標準為≥90％。
3、酪蛋白
酸度：應符合標準。
功能性實驗：10％酪蛋白作為樣本進行測定，不得出現非特異性反應。
4、標記用酶
根據不同生產廠家的檢定方法和質量標準進行檢定，RZ值要大于2.8。
（三）化學原材料
參照《中國生物制品主要原輔材料質控標準》分析純級別檢定。主要的檢測指標包括一些基本的一般鹽類檢測、溶液PH值、重金屬檢測、溶解情況的檢測、干燥失重的檢測。熾灼殘渣等。
1、無機類：主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。
有機類：主要包括有吐溫20、三羥基氨基甲烷等。
2、特殊化學原料：Eu-DTTA，魯米諾等。
Eu-DTTA純度分析與鑒定：要求Eu-DTTA各功能團符合分子結構，純度在96%以上。
（四）其他原輔料
1、微孔板條
外觀：明亮處用肉眼觀察板條的外觀質量應無劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面光滑。板條與微孔反應條塑料框架應配合合適。
材質：微孔反應板條每孔加200µL增強液，用時間分辨熒光分析儀檢測其熒光值，平均本底熒光值≤1500。吸附能力和精
密性：用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測熒光值，計算其CV值、批內差標準CV≤5％,批間差CV≤10％。
2、其他
粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等都應建立適合本企業的相應質量控制標準。
三、試劑盒各組分的生產
該部分重點列出各組分生產中應寫進質量標準（規程）的工藝要點及質量控制要點，應包括產品的主要生產工藝，在以后檢查企業時可依照該部分內容考察其是否按照所報工藝生產。
診斷試劑盒主要組分的生產包括包被反應板、標記物制備、各種溶液的配置、凍干、分包裝等步驟；并通過產品的半成品檢定和成品檢定兩個質控過程來完成。
（一）固相載體的制備（因不同產品使用的包被載體有很大區別，在此以標準96孔微孔反應板為例進行描述）
1、包被板的準備
準備經檢驗合格的包被板，記錄批號、數目、狀態標識。
質控項目：尺寸，外觀，包裝。
2、包被液的配制
配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原到工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作濃度的包被液應在規定時間內使用。
質控項目：包被緩沖液配方，pH，包被物成份。
3、包被板的包被
包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數量。
質控項目：包被體積，溫度，時間，過程監控。
4、洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板）
按配方配制洗板工作液。
質控項目：洗板工作液配方，pH。
5、封閉液的配制
按配方配制封閉液。
質控項目：封閉液配方，pH。
6、洗板和封閉
包被完成后，抽去孔內包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以不洗板），加入封閉液。
質控項目：封閉體積，溫度，時間，過程監控。
質檢項目：封閉前檢驗包被均一性。
7、抽干
封閉后的反應板，抽干孔內液體。
質控項目：過程監控。
8、干燥
反應板應按工藝的要求進行干燥。
質控項目：溫度，濕度，時間，過程監控等。
9、密封包裝
將干燥后的反應板用鋁箔袋密封包裝，內放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。
質控項目：密封性能，標示及效期等。
10、反應板（半成品）檢驗
對裝袋密封后的反應板進行抽樣檢驗，外觀、板內變異、板間變異。
（二）滴配過程
1、酶結合物的制備（根據各產品實際情況，該步驟可不進行）
采用常規過碘酸鈉——乙二醇法將相關的抗體（或抗原）標記辣根過氧化物酶（或其他酶），酶標記后的抗體（或抗原）應加入適當的保護劑保存于低溫。
質控項目：標記方法，過程控制。
2、酶結合物的鑒定
（1）功能性實驗
將酶結合物用酶稀釋液稀釋后，用于產品的滴配，其結果應符合相關試劑盒的質量標準。
（2） 穩定性
將酶結合物用酶稀釋液稀釋，進行2-8℃，及熱穩定性實驗，滴配結果應符合相關試劑盒的質量標準。
3、酶結合物稀釋液
按酶結合物稀釋液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于規定時間內使用。
質控項目：酶結合物稀釋液配方，pH。
4、酶結合物工作濃度的滴配
取酶結合物，用酶結合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應板進行滴配。測定系列標準品及相應的質控品，確定使體系達到*的酶結合物工作濃度。
5、酶結合物工作液配制
將所需量酶結合物和酶結合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。
質檢項目：分裝前檢驗，用配套的反應板進行檢驗，外觀、靈敏度、質控品測定值、定量產品應作校準品線性檢測。
6、酶結合物工作液的分裝
按工藝要求分裝酶結合物工作液。
質控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數量，分裝量，封裝后密封性。
7、酶結合物工作液（半成品）檢驗
對分裝后的酶結合物工作液進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、靈敏度、校準品劑量-反應曲線線性、質控品測定值。
（三）校準品、陰陽性對照或質控品的制備
1、稀釋液
按稀釋液的配方配制，存放在2?8℃或-20℃保存，并于有效期內使用。
質控項目：稀釋液配方，pH。
2、校準品、陰陽性對照或質控品的配制
校準品、陰陽性對照或質控品的配制要具有溯源性，可參照國家標準品、WHO標準品或其他級別的標準物質進行配制。
質檢項目：分裝前檢驗，準確性、劑量——反應曲線線性（定量產品）、質控品測定值。
3、校準品、陰陽性對照或質控品的分裝
按工藝要求分裝校準品、陰陽性對照或質控品。
質控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數量，分裝量。
4、校準品、陰陽性對照或質控品（半成品）檢驗
對分裝后的校準品、陰陽性對照或質控品進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、準確性、劑量——反應曲線線性（定量產品）、質控品測定值。
（四） 化學發光底物的制備
1、底物緩沖液
按底物緩沖液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于有效期內使用。
質控項目：底物緩沖液配方，pH。
2、化學發光底物（氧化劑和發光劑）的配制
分別按氧化劑和發光劑的配方在底物緩沖液中加入相應的氧化劑和發光劑
質控項目：氧化劑和發光劑配方。
質檢項目：分裝前檢驗，本底、發光強度。
3、化學發光底物（氧化劑和發光劑）的分裝
按工藝要求分裝化學發光底物（氧化劑和發光劑）。
質控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數量，分裝量，封裝后密封性。
4、化學發光底物（半成品）檢驗
對分裝后的化學發光底物進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、本底、靈敏度、發光強度。
（五）銪標記物的制備
針對不同的標記生物原料，確定不同的標記制備工藝，包括銪-DTTA與標記生物原料的比例，標記溫度和標記時間、標記得率的計算標準等。在實際操作過程中要求嚴格按照SOP進行操作
（六）凍干
各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應該呈現疏松的粉末狀固體，具有一定的形狀，復溶*、迅速，呈澄清透明液體。
（七）分裝、燈檢和貼簽
分裝量用減重稱量法進行測量，把質量換算成體積后進行分裝量的控制。燈檢是目測檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質等。
（八）包裝
根據試劑盒包裝SOP要求及說明書的要求，以流水線操作形式進行包裝。包裝時應嚴格檢查品名、批號、裝量，認真核對各物料數量，并在關盒前進行復核。
四、質量控制
該部分應寫出半成品及成品質量控制要點，重點寫出控制項目，質量標準，檢定方法等。試劑的質量控制一般應包括陽性樣品符合率，陰性樣品符合率，靈敏度（zui低檢出量），特異性，定量范圍，定量曲線的線性，精密性，穩定性等。應特別注意，如有國家參考品則試劑的成品檢定應采用國家參考品，半成品檢定可采用國家參考品或按照國家參考品標定的企業參考品，參考品基質應與所檢測樣品一致。（如檢測人血應用人血作參考品等）。
（一）半成品質量控制
1、半成品抽樣
檢驗人員按批號抽取規定數量的半成品，作好標識。
2、質控品的要求
用于半成品質量控制的質控品包括陽性樣品符合率，陰性樣品符合率，靈敏度（zui低檢出量），特異性，定量范圍，定量曲線的線性，精密性，穩定性等指標，如具有國家標準品或參考品的產品應使用國家標準品（參考品）或經標化質控品進行檢定。如無國家標準品或參考品可采用企業質控品。企業參考品質量標準不得低于國內已批準同類產品質量標準。
3、半成品檢定
根據各個試劑盒的企業標準或者制檢規程進行半成品的檢定，對所抽樣的半成品做準確性、靈敏度、特異性、精密性、相關性、批內差等試劑盒性能方面的檢測，并進行穩定性試驗，其準確性、靈敏度、特異性、精密性、相關性、批內差等的檢測應達到相應標準的要求。
（1）物理性能：液體組分應澄清，無沉淀或絮狀物；凍干組分呈疏松體或晶狀，加水后應在規定時間內*溶解；所有組分應無包裝破損。
（2）試劑盒校準品準確性：試劑盒的校準品與相應濃度的國家標準品或企業標準品同時進行分析測定，要求兩條曲線不明顯偏離平行；以國家標準品或企業標準品為對照品，試劑盒校準品的實測效價與標示效價的比應在0.900?1.100之間。或用其它適宜方法測定。
（3）劑量——反應曲線的線性：劑量-反應曲線相關系數（r）
值應不低于0.9900。
（4）精密度：分析內，分析間精密度應到相應標準的要求。
（5）特異性:應達要求。
（6）靈敏度:應達到相應標準的要求。
（7）穩定性：試劑盒各組分應留樣，2?8℃定期作穩定性考核，同時作37℃熱穩定性試驗，推算出2?8℃存放及37℃熱穩定性的關系。37℃放置規定時間，測定結果應符合上述各項要求。
（二）成品質量控制
1、成品抽樣
檢驗人員按批號抽取規定數量的成品，作好標識。用于生產許可審批的每批生產數量不得低于10000人份。
2、成品檢定
根據各個試劑盒的企業標準或者制檢規程進行成品的檢定，對所抽樣的成品做準確性、靈敏度、特異性、精密性、相關性、批內差等試劑盒性能方面的檢測，并進行穩定性試驗，準確性、靈敏度、特異性、精密性、相關性、批內差等的檢測應達到相應標準的要求。
（1）物理性能：液體組分應澄清，無沉淀或絮狀物；凍干組分呈疏松體或晶狀，加水后應在規定時間內*溶解；所有組分應無包裝破損。
（2）試劑盒校準品準確性：試劑盒的校準品與相應濃度的國家標準品或企業標準品同時進行分析測定，要求兩條曲線不明顯偏離平行；以國家標準品或企業標準品為對照品，試劑盒校準品的實測效價與標示效價的比應在0.900?1.100之間。或用其它適宜方法測定。
（3）劑量——反應曲線的線性：劑量-反應曲線相關系數（r）值應不低于0.9900。
（4）精密度：分析內，分析間精密度應到相應標準的要求。
（5）特異性:應達要求。
（6）靈敏度:應達到相應標準的要求。
（7）穩定性：37℃放置規定時間，測定結果應符合上述各項要求。
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