蛋白質免疫印跡膜再生液的使用方法及操作流程！

百歐博偉生物：自1979年推出以來，蛋白質印跡（WB）成為一種簡單而廉價的技術。目前，WB 被廣泛應用于蛋白質的檢測和半定量及其表達水平的研究。在實際應用中，我們經常反復剝離和再檢測，以檢測印跡膜上的不同蛋白質來節省時間和金錢。然而，每一輪剝離會去除一些轉移到印跡膜上面蛋白，影響實驗結果。本文將介紹一種蛋白質免疫印跡膜再生液的使用方法。

蛋白質免疫印跡流程

步驟（1）：采用蛋白質免疫印跡膜，利用辣根過氧化物酶、化學發光試劑，進行蛋白質免疫印跡檢測；

步驟（2）：洗去步驟（1）已使用的蛋白質免疫印跡膜上的化學發光試劑；

步驟（3）：將步驟（2）洗去化學發光試劑的蛋白質免疫印跡膜加入到權利要求1-3任一項所述的蛋白質免疫印跡膜再生液中進行震蕩孵育；

步驟（4）：取出步驟（2）中的膜，用雙蒸水和/或TBST溶液洗滌，得到辣根過氧化物酶已經失活的膜;

步驟（5）：采用步驟（4）得到辣根過氧化物酶已經失活的膜，利用辣根過氧化物酶、化學發光試劑，進行蛋白質免疫印跡檢測。

作為優選，步驟（5）中所檢測的蛋白質與步驟（1）所檢測的蛋白質為非同種蛋白質。

作為優選，步驟（1）-步驟（4）重復循環至少兩次，在后所檢測的蛋白與在先所檢測的蛋白均為非同種蛋白。

所述蛋白質免疫印跡膜再生液的配方中包括巴豆酸，所述巴豆酸的濃度為5-20%質量比，通過巴豆酸滅活二抗標記的辣根過氧化物酶(HRP)來實現蛋白質免疫印跡膜的再次使用，所述再生液及蛋白質免疫印跡膜再生液的使用方法不影響抗體與印跡上的抗原之間的結合以及印跡膜上抗原含量的變化，并可以重復使用，并且在NC膜的處理中具有優勢：使用CA 預先孵育不僅可以穩定 NC 膜結合蛋白質，而且可以提高 NC 膜檢測的靈敏度。

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