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等度液相色譜分析儀是一種常用的液相色譜分析儀器，其工作原理是基于不同物質在固定相和流動相之間的分配系數不同而實現分離的。在分離過程中，流動相攜帶樣品通過色譜柱，樣品中的各組分在色譜柱上發生吸附、解吸、擴散等過程，從而實現分離。分離后的組分依次進入檢測器，檢測器將其轉化為電信號，最后由數據處理系統進行處理和分析。
等度液相色譜分析儀主要由輸液泵、檢測器、色譜柱、進樣系統以及數據處理系統等部分組成。其中，輸液泵負責提供穩定、精確的流動相；檢測器用于檢測樣品組分；色譜柱則是分離樣品的關鍵部件；進樣系統負責將樣品注入色譜柱；數據處理系統則負責收集、處理和分析檢測數據。
等度液相色譜分析儀的操作步驟如下：
1、準備工作：
檢查儀器狀態，確保所有連接管路的連接緊固，檢查進樣器、檢測器和泵的工作情況。確保試劑瓶中有足夠的溶劑，并檢查柱溫箱和樣品轉移系統的溫度設定。
始終保持高效液相色譜儀器包括內在系統的清潔。室內溫度始終保持恒定，因為室溫的變化對高效液相色譜檢測器有影響。
2、流動相準備：
將已經過濾并脫氣的流動相注入儲液罐。用流動相沖洗金屬過濾器，然后將過濾器浸入儲液罐的流動相中。
將儲液罐放置在一定的高度，以避免由于搬運和其他操作人員的移動而造成不必要的跌落。
3、啟動儀器：
按以下順序依次啟動高效液相色譜儀：泵→檢測器→高效液相色譜軟件→按預先計劃的方法設置軟件參數，如分析時間、檢測波長、流速等。
4、系統排氣與基線穩定：
啟動泵，運行5分鐘，主要是為了排除系統中的氣泡，結束后關閉所有排氣閥。然后按照預先計劃的速度，以固定的速率（如1mL/min左右）運行流動相，走基線，直到基線平穩，就可以在計算機軟件上進行監視。
5、樣品準備：
根據實驗目的，準備好待分析的樣品。樣品準備包括樣品提取和預處理。提取要求根據分析物的特性選擇適當的方法，如溶劑萃取、固相萃取等。預處理包括濾過、稀釋、調整pH等步驟，確保樣品符合分析要求。
6、進樣：
在進樣之前，需要通過洗滌進樣針和管道以去除前一個樣品的殘留物。進樣體積和進樣速度根據樣品的濃度和分析需要進行設定。
7、參數設置與進樣分析：
基線平穩后，在軟件中設置樣品的運行參數，如流速和分析時間等。分析時間會因樣品、流速、柱長等因素變化。
參數設置完畢后，將固定體積的樣品溶液注入進樣閥，然后在軟件中啟動注入命令，進樣器中的樣品溶液就隨流動相進入色譜柱。
8、數據監測與分析：
通過軟件監視各項讀數，當檢測器檢測到樣品所有峰值，停止運行并設置新的進樣。在下一個樣品分析前，建議留出5-10分鐘，待流動相通過色譜柱，以便清洗之前樣品的殘留物；確認基線穩定后，進行下一次注射。
9、結束操作：
分析結束后，先關閉檢測器，然后關閉泵，最后關閉軟件。
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