使用厭氧培養箱進行微生物培養需要遵循以下步驟和注意事項:
1. **準備工作**:
- 確保厭氧培養箱放置在干燥、通風、無振動的地方,并連接好氣源、電源。
- 消毒并清潔培養箱內外表面,準備好培養基和待培養的細胞或微生物。
2. **操作室厭氧環境形成**:
- 根據使用要求放置好必要的配件和器具,并向操作室內放入無毒塑料袋。
- 開啟電源,打開溫度控制器,并調節所需的溫度。
- 操作室內放入鈀粒(封閉)和干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。
- 關緊取樣室內外門,并進行真空檢查。
- 進行至少三次的氣體置換,第一次和第二次通常使用氮氣,第三次使用混合氣體(如N2:H2:CO2 = 85%:10%:5%)。
3. **催化脫氧**:
- 打開鈀粒除氧劑,接通除氧催化器電源進行催化除氧。
- 一小時后打開美蘭指示劑觀察其變色,以確認操作室內達到厭氧環境。
4. **滅菌處理**:
- 開啟紫外線滅菌燈,對室內進行滅菌處理,滅菌時間自定。
5. **菌種的置入和培養**:
- 檢查并關閉取樣室的門。
- 將菌種放入取樣室后,打開取樣室的外門并關閉外門。
- 取樣室充滿氮氣并更換三次,確保厭氧條件。
- 接種棒滅菌器的應用,使用鎳鉻電熱絲使電極短路,以致變紅進行滅菌。
6. **操作過程中的注意事項**:
- 在操作前,必須關閉厭氧培養箱門,并檢查是否密封。
- 使用手套或消毒操作口進行操作。
- 不要在厭氧培養箱內抽煙或使用火源等可能引起爆炸的物品。
- 定期檢查氧氣、氫氣和二氧化碳氣體濃度,避免漏氣。
7. **停止使用**:
- 停止使用后,將培養箱內殘留的氣體*全排除,并對培養箱進行清潔和消毒。
遵循這些步驟和注意事項,可以確保在厭氧培養箱中正確地進行微生物培養。
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