診斷時zui重要的步驟是選擇合適的樣品,這樣才能獲得有用的實驗室資料。一般來講,從幼豬而非大豬中采集樣品,因為在幼豬中的PRRSV的數量多,持續時間長。感染后4—6周能從乳豬、斷奶仔豬或架子豬的血清中分離血清。病毒分離用的樣品在采集后迅速冷藏或凍貯,因為PRRSV對病毒很敏感,在運輸過程中必須注意溫度不能升高,否則PRRSV易被滅活而不能進行病毒分離。此外,病毒對pH的穩定性范圍很小,因此必須保證無菌環境,以避免細菌污染而導致pH改變。樣品必須用絕緣和防漏的容器包裝,有足夠的冷凍劑,迅速遞送到相關實驗室對PRRS的病毒學診斷比較困難,這主要由于分離病毒需要選用豬肺泡巨噬細胞,這種細胞來自6~8周齡的豬,并且是無特定病原體豬(SPF)這種豬不是所有實驗室都可以方便得到的。一般的傳代細胞系對該病毒的易感性差,不能*替代肺泡巨噬細胞。某些猴腎細胞系(MARC-145)能較好的替代巨噬細胞,但不支持所有的分離物,尤其是對歐洲型毒株。
鑒定PRRSV的實驗室技術還有免疫組化和免疫熒光方法,其中以肺和扁桃體組織用于檢測效果較好,這兩種方法比用病毒分離方法更迅速且無需細胞培養設施。免疫組化法可以對用福爾馬林固定的組織塊病毒鑒定,并能對病毒進行溯源性分析,但這兩種方法的正確性受操作人員的技巧影響很大,再經病毒分離或PCR鑒定應用原位雜交法能檢測和區別PRRS病毒北美洲基因型及歐洲株基因型,但它主要用于研究,并不適于實驗室診斷。
反轉錄—聚合酶聯反應(RT—PCR)以及套式PCR法檢測病毒RNA的敏感性很高,當病毒分離困難時很有用,如測定精液或病毒因為自溶而部分降解。在豬的急性感染中,PCR與常規病毒分離同等敏感,在感染的康復階段比病毒分離更為敏感。自動化的PCR試驗不易發生污染,為診斷實驗室提供敏感而特異的試驗,而且費用大為下降。現在已廣泛用于包括血清在內的多種組織的檢測;現已發展了多種PCR診斷技術,其中嵌套式PCR比普通PCR提供了更高的敏感性,多重PCR可以用于區別北美型和歐洲型PRRS病毒分離株;現在更新的熒光定量RT—PCR技術也已經用于組織或血清樣本中PRRSV的定性和定量檢測。通過這些分子生物學的方法,我們可以在難以進行病毒分離的情況下快速準確地檢測病原。zui近,開發的PCR產物進行限制性片段長度多態性分析的方法,可用于PRRS野毒株以及疫苗分離株的分子流行病學檢測。
相關產品
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。