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PCR DNA聚合酶都有什么?

來源:天津益元利康生物科技有限公司   2024年10月09日 13:47  

DNA聚合酶是催化DNARNA為模板合成DNA的一類酶的總稱,又稱DNA依賴的DNA聚合酶(DNA—dependent DNA polymerase,DNA pol),它是以親代DNA為模板,催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一類酶。此酶是美國(guó)科學(xué)家Arthur Komberg1957年在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)的,被稱為DNA聚合酶DNA polymerase Ⅰ,簡(jiǎn)稱polⅠ)以后陸續(xù)在其他原核生物及真核生物中找到了多種DNA聚合酶。這些聚合酶的共同特點(diǎn)是:它們都能把脫氧核糖核苷酸(dNTP)連續(xù)的加到雙鏈DNA引物鏈的3'-羥基末端上,催化核苷酸的聚合,形成新的DNA鏈。

PCR DNA聚合酶都有什么?

PCR DNA聚合酶的種類包括Taq DNA聚合酶、高保真DNA聚合酶、熱啟動(dòng)DNA聚合酶、等溫?cái)U(kuò)增DNA聚合酶和鏈置換DNA聚合酶等。

一、PCR DNA聚合酶

1. Taq DNA聚合酶

特點(diǎn):Taq DNA聚合酶是從水生棲熱菌中分離提取的,具有很高的熱穩(wěn)定性,能夠在70℃保持活性,適合標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)。它缺乏3’→5’核酸外切酶活性,因此無校正功能,容易產(chǎn)生錯(cuò)配堿基。

應(yīng)用:用于常規(guī)PCR擴(kuò)增,尤其是當(dāng)對(duì)保真度要求不高時(shí)。其擴(kuò)增產(chǎn)物3’末端帶有A尾,可直接用于TA克隆。

2. 高保真DNA聚合酶

特點(diǎn):這類酶具有3’→5’核酸外切酶活性,能夠校正錯(cuò)誤插入的核苷酸,顯著降低錯(cuò)配率。常見的有Pfu、KODPhusion等。

應(yīng)用:適用于需要高保真度的應(yīng)用場(chǎng)景,如基因克隆、定點(diǎn)突變、測(cè)序及SNP分析等。例如,Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase具有很的保真性和擴(kuò)增效率,適用于復(fù)雜模板的高保真擴(kuò)增。

3. 熱啟動(dòng)DNA聚合酶

特點(diǎn):通過化學(xué)修飾或抗體結(jié)合,在室溫下抑制其活性,直到高溫激活。這種酶可減少非特異性擴(kuò)增,提高PCR反應(yīng)的特異性和靈敏度。

應(yīng)用:適用于需要高特異性擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn),如多重PCR、復(fù)雜模板的擴(kuò)增等。例如,Hieff Union Hotstart High Specific Taq DNA Polymerase能夠有效防止非特異性擴(kuò)增,并提高擴(kuò)增特異性。

4. 等溫?cái)U(kuò)增DNA聚合酶

特點(diǎn):這類酶具有鏈置換活性和5’→3’聚合酶活性,能在恒溫條件下進(jìn)行快速、高效、特異性擴(kuò)增。

應(yīng)用:適用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如LAMPCPARCA等。例如,Bst Ⅱ Plus DNA Polymerase具有更高的靈敏度、擴(kuò)增效率和穩(wěn)定性,且增加了dUTP耐受性,非常適合基于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的應(yīng)用。

5. 逆轉(zhuǎn)錄DNA聚合酶

特點(diǎn):這類酶以RNA為模板,按5’→3’方向合成互補(bǔ)DNAcDNA),常用于研究基因表達(dá)。

應(yīng)用:用于將RNA轉(zhuǎn)錄為DNA,如RT-PCRqRT-PCR等。常用的逆轉(zhuǎn)錄酶包括M-MLVAMV。

6. 鏈置換DNA聚合酶

特點(diǎn):具有強(qiáng)鏈置換活性,可以在DNA復(fù)制過程中取代舊鏈,常用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。

應(yīng)用:適用于基于鏈置換的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如LAMP和滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)。例如,Bca best聚合酶和phi29 DNA聚合酶在擴(kuò)增速度、產(chǎn)量和熱穩(wěn)定性方面都有優(yōu)異的表現(xiàn)。

二、凡知醫(yī)學(xué)DNA聚合酶推薦:

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

FG2104

凡知醫(yī)學(xué)高保真DNA聚合酶

250 units

FG2103

凡知醫(yī)學(xué)熱啟動(dòng)Taq Pro DNA聚合酶

100U;500U;2500U

FG2101

凡知醫(yī)學(xué)Taq DNA聚合酶

500U;1KU



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