一、細胞核結構:
細胞核的結構有核膜、核仁、染色質、核基質。主要功能是遺傳物質DNA儲存和復制的主要場所,是細胞遺傳和代謝的控制中心。
①核膜:核膜是細胞核的外部邊界,由內外兩層單位膜組成,將細胞核與細胞質分隔開來。
②核孔復合體:核孔復合體是核膜上的特殊結構,由多種蛋白質組成,形成環狀開口,允許大分子物質如mRNA、tRNA以及某些蛋白質在核質之間穿梭。
③染色質:染色質是細胞核內的重要組成部分,由DNA和蛋白質組成,是遺傳信息的載體。
④核仁:核仁是細胞核內的一個致密結構區域,與核糖體的形成密切相關。
⑤、核基質或核骨架:核基質或核骨架是細胞核內除染色質和核仁以外的所有成分,包括核液和核骨架兩部分。
二、對死細胞進行染色的核染料
(1) PI染料
PI,全稱為碘化丙啶(Propidium Iodide),是一種廣泛應用于細胞生物學和病理學研究中的細胞核染色試劑。
PI染色原理:
在正常情況下,活細胞的細胞膜是完整的,具有選擇透過性,能夠阻止PI等大分子物質進入細胞內部。
然而,在細胞凋亡中晚期或壞死過程中,細胞膜的完整性受到破壞,通透性增加,使得PI能夠穿透細胞膜進入細胞內部。
進入細胞內部的PI能夠特異性地與雙鏈DNA結合,形成PI-DNA復合物,熒光強度增加20-30倍。
這種復合物在特定波長的激發光照射下會發出紅色熒光,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀觀察到細胞核的染色情況。
(2) EthD-I法
Ethidium Homodimer-I(EthD-I)又叫做同二聚乙錠-I,是一種非細胞通透性活率指示劑,它自身熒光很弱,但一旦與DNA結合后,熒光會明顯增強(通常增強30多倍),發出紅色熒光(最大激發/發射波長分別為大約528/617nm)。由于EthD-I帶有較強的正電荷,它不能穿過完整的活細胞膜,因此通常用于檢測死細胞或細胞膜受損的細胞。當細胞膜完整性受損時,EthD-I能夠進入細胞內部并與DNA結合,從而發出明亮的紅色熒光,指示細胞的死亡狀態。
(3) DAPI
DAPI中文4',6-二脒基-2-苯基吲哚,是一種能夠對DNA進行染色的細胞核染料,與DNA中的A-T堿基對進行特異性結合,形成穩定的復合物。這種結合不會改變DNA的二級結構,但會使DAPI的熒光強度顯著增強。
三、對活細胞進行染色的核染料
(1) Hochest
Hoechst染料是一類能夠穿透細胞膜并與DNA結合的非嵌入性熒光染料,通過與DNA中的堿基進行氫鍵結合,形成染料-DNA復合物。該復合物在紫外光激發下會發射出藍色熒光。由于DNA分子在細胞核中富集,因此Hochest染色可用于標記細胞核。
(2) Draq 5
Draq 5是一種具有高親和力的遠紅外熒光活細胞DNA染料,是一種對雙鏈 DNA 具有高親和力的蒽醌染料。它可以透過細胞膜的染料,可標記活細胞或固定后/死細胞。
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