在進行低氧或高氧培養時,確保細胞的存活率和生長效率需要考慮以下幾個關鍵因素:
1. 精確控制氣體濃度:使用三氣培養箱可以精確控制氧氣和二氧化碳的濃度。例如,Thermo Scientific 的 HERAcell 三氣培養箱能夠提供接近機體內環境的培養條件,專為優化哺乳動物細胞生長設計,能夠提供完善的低氧環境,以實現細胞更快、更健康地生長 。
2. 細胞類型和培養階段:不同的細胞類型對氧氣和二氧化碳的濃度有不同的需求。例如,某些細胞在低氧條件下(如1%-5% O2)可能表現出更好的生長和分化,而其他細胞可能需要更高的氧氣濃度。在培養的不同階段,細胞對氣體的需求也可能發生變化。
3. 溫度和pH值:維持適宜的溫度和pH值對細胞存活和生長至關重要。大多數細胞培養需要在36°C至37°C的溫度下進行,且pH值通常維持在7.4左右。使用基于CO2-碳酸氫鹽的緩沖液緩沖的培養基時,需要使用外源性CO2來維持pH值 。
4. 避免污染:細胞培養過程中要嚴格無菌操作,避免細菌、真菌或支原體的污染,這些都會對細胞的存活率和生長效率產生負面影響。
5. 營養物質和血清:培養基中的營養物質和血清對細胞的生長和存活至關重要。需要確保培養基中的成分新鮮且未被破壞,且血清的質量良好。
6. 細胞密度和傳代:細胞接種的密度和傳代的頻率也會影響細胞的生長。過高的細胞密度或過于頻繁的傳代可能導致細胞應激和生長減緩。
7. 監測和調整:定期監測細胞的生長狀態和培養條件,及時調整氣體濃度、更換培養基和進行必要的操作,以確保細胞的最佳生長環境。
通過上述措施,可以在低氧或高氧培養條件下優化細胞的存活率和生長效率。
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