革蘭氏染色法是細菌學中zui常用的一種鑒別染色法。 

材    料 

    1．葡萄球菌和大腸桿菌混合菌液。

    2．結晶紫染色液。

    3．革蘭氏碘液。

    4．95％酒精。

    5．番紅染液。

    6．載玻片。

方   法 

    一、涂片標本的制備（見實驗一）

    二、革蘭氏染色法 

    1．初染：在上述已固定的涂片上，滴加結晶紫染液，染色1分鐘，水洗。

    2．媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1—3分鐘，水洗。

    3．脫色：滴加 95％酒精，并頻頻搖動玻片，至無紫色脫出為止（約20秒），水洗。

    4．復染：加番紅染液，復染半分鐘，水洗，用吸水紙印干后，油鏡檢查。

    結果：視野中可以察見兩種細菌：

    葡萄球菌：紫色、球形、葡萄狀排列。

    大腸桿菌：紅色、桿狀、散在排列。

【附】革蘭氏染色法各種染液的配制 

    一、結晶紫（Ｃｙｓｔａｌ   ｖｉｏｌｅｔ）染液

    結晶紫    2.0g

    草酸銨    0.8g

    95％酒精 20ml

    蒸餾水    80ml

    先將結晶紫溶于酒精，草酸銨溶于蒸餾水中，然后將兩液混合，靜置４８小時使用。此染液穩定，置密閉的棕色瓶中可儲存數月。

    二、革蘭氏碘液

    碘         1.0g

    碘化鉀     2.0g

    蒸餾水     300ml

先將碘與碘化鉀混合，加水少許，略加搖動，待碘*溶解后再加蒸餾水至定量。

三、脫色劑：95％酒精

四、復染劑：番紅（沙黃Ｓａｆｒａnｉｎｅ Ｏ）染液

沙黃（Ｓａｆｒａnｉｎｅ Ｏ） ０．２５ｇ

９５％乙醇 １０ｍｌ

蒸餾水 適量

將沙黃溶解于９５％乙醇中，待*溶解再加蒸餾水至１００ｍｌ