NMR的定量分析方法

與其他光譜方法相同，NMR定量分析是通過比較不同的吸收峰強度實現的。在進行NMR定量分析時，對于確定的核（如質子），其信號強度與產生該信號的核（如質子）的數目成正比，而與核的化學性質無關，故一般只要對該化合物中某一基團上質子引起的峰面積進行比較，即可求出其含量。當分析混合物時，利用內標法或相對比較法分析混合物中某一化合物時，無需該化合物的純品作為對照標品。內標法只要找一合適的內標物進行比較就可求出其含量；而采用各個組分的各自基團上質子產生的吸收峰強度進行相對比較，便可求得其相對含量。因此，在測量峰面積或峰高以前，必需了解化合物的各組成基團上質子所產生共振峰的相對位置，也就是它們的化學位移值，并選擇一個合適的峰作為測量峰。

USP（24）采用的NMR定量分析方法主要有兩種：

1、內標法（測量法）：

此法為NMR分析zui常用的方法，它與GC內標法相似，在樣品溶液中，直接加入一定量的內標物后，進行NMR光譜測定。將樣品基團上的質子引起的共振峰面積進行比較，當樣品與內標均經精密稱重時，則樣品的重量（）可由下式求得：

=Ws×（Ax/As）×（E/Es）

式中，Ws為內標物重量；Ax為樣品峰面積；As為內標物峰面積；E為樣品在該化學位移處的質子當量，即E=樣品分子量/產生該共振峰的基團中的質子數；Es為內標物在該化學位移處的質子當量，即Es=內標物分子量/產生該共振峰的基團中的質子數。若樣品稱重為W，則百分含量=/W×100%

對內標物的要求：一個較好的內標物至少應具備以下性質：①不應與樣品中任何組分相互作用。②能產生單一的共振峰。在掃描的磁場區域中，參比共振峰與樣品峰的位置至少有30Hz間隔。③應能溶于分析溶劑中。④應有盡可能小的質子當量（Es）。NMR定量分析常用的內標物有：六甲基三硅氧烷（0.15ppm）；三噁烷（5.10ppm）；吡嗪（8.51ppm）；苯或苯甲酸芐酯（5.3ppm處，芐基質子的吸收峰），適用于非芳香化合物；馬來酸適用于非鏈烯氫化合物。

2、相對測量法：

當不能獲得樣品的純品或合適的內標物時，可用相對測量法進行分析。計算含量是以基團上的一個質子引起的吸收峰面積（A1/n1）和雜質基團上一個質子引起的吸收峰面積（A2/n2）進行比較，然后按下式計算樣品與該雜質的相對百分含量：

樣品的相對百分含量= ｛（A1/n1）/〔（A1/n1）+（A2/n2）〕｝×100%

式中，n1，n2是基團的質子數。

NMR定量分析方法簡單、快速、專屬性高和不破壞被測樣品，可選擇性地測定混合藥物或藥物制劑中的組分乃至藥物的立體異構體。只要樣品中每個組分有一個或一組特征的、且不重疊的吸收峰存在時，一般都有可能應用NMR方法進行定量分析。

D Offset（基線位置的突然改變
1電源電壓波動 使用穩壓器
2 電路接口處連接不好 檢查，清洗其接口處，擰緊接口
3進樣口被污染
4色譜柱被污染
5毛細管末端插入檢測器太深
6 檢測器被污染
E毛刺
1 電磁干擾 關閉電磁干擾源
2顆粒污染進入檢測器
3氣路密封松動，氣體泄露 擰緊松動的密封
4檢測器內部電路接口或輸入，輸出信號接口松動 檢查，清洗，擰緊接口，更換之
積塵或被腐蝕
F Wander（低頻率的噪音）
1溫度，壓力等環境條件的波動 找到環境因素變化與基線的關系，然后穩定之
2溫度控制漂移 測量檢測器的溫度
3 載氣中含雜質（溫度穩定時） 更換載氣或氣體凈化器
4進樣口被污染
5毛細管被污染
6氣體流速控制失靈 清洗或更換氣體