核酸提取磁珠/微球的簡論
—吉恩特生物實驗室
生物納米磁珠原本是屬于舶來品,在各大論文期刊早就有相關合成的方法。由于其兼具高分子微球順磁性,廣泛應用于核酸提取、蛋白純化、分子診斷、靶向治療、磁成像等領域,只是說它的落地應用隨著疫情而火爆,后繼化學發光平臺的推廣,免疫檢測的升級換代,漸漸進入了大家的視野而被熟知。
常規的磁珠內核為納米級四氧化三鐵,合成方法有共沉淀法、微乳液法、熱分解法、水熱和溶劑法、溶膠凝膠法等,其中以共沉淀法、熱分解法、微乳液法、水熱和溶劑法在四氧化三鐵磁性納米粒子的合成中常用。不同的論文都標榜自己的方法既經濟又快捷,有待論證。由于國內磁珠工業化生產的時間較晚,目前較好的磁珠多來自于國外品牌,如:Thermo,安捷倫,JSR等都是耳熟能詳磁珠廠家,國內公司如為度、吉恩特、海貍、博岳等很多企業正在迎頭趕上進行國產替代。
磁珠的超順磁性:在外加磁場作用下,其表現為具有很強的順磁性,進行磁分離和磁性導向,撤去磁場時磁性很快消失,不會被磁化。這一特性,為生物實驗中的快速提純,自動化分離提供了理論基礎。
磁珠表面功能基團的多樣性:通過共聚或化學改性,可以實現磁珠表面多種功能性團包括硅羥基、氨基、羧基、醛基、環氧基、Toysl、親和素等等,不同的基團對應著不同的偶聯方式,連接多種生物活性物質,如免疫蛋白、生物酶和細胞等等,應用到不同的領域。
磁珠的結構:
核殼結構,即無機磁性顆粒為核,聚合物為殼,這種復合微球中,無機磁性微粒被聚合物包埋,形成典型的核殼結構。在早期階段由于生產工藝的限制大部分磁珠都采用這一結構。優勢是生產工藝簡單,經濟效率高。
彌散結構,即無機磁性顆粒是遍布于在聚合物微球中。現階段制作工藝比較成熟,多數國外公司都采用這一模式,其實這個模式和量子點熒光微球差不多,用微乳液法包起來。對生產設備,控制要求較高。
夾心結構,即內外層均為聚合物,中間為無機磁性顆粒,這類復合微球往往是通過對第二層磁球再包裹一層聚合物而制備的。工藝復雜,過程不好控制,殘次率較高。
磁珠挑選的依據有哪些呢?
其實不管你是什么基團修飾的磁珠,我們主要看的是它的性能,作為固相載體,修飾的基團只是為了提取核酸、偶聯目標蛋白等。諸多品牌,每一個都說的天花亂墜,到底選擇哪家的產品呢?
重復性:批次間穩定性,為終端客戶的產品作出有效保證,一般要求批內不大于2%,批間不大于5% 。
分散性:分散性不好會造成磁珠聚集,容易沉降,影響上機結果不均勻,CV值差。
磁通量:顆粒的大小會影響磁通量,影響磁珠聚集速度,過低磁吸太慢。
結合能力/比表面積:磁珠表面基團負載量,影響生物活性原料用量,知道表面基團的負載量,才好計算偶聯應該加多少的對應蛋白,活化劑等
表面封閉情況:封閉不好,存在非特異性吸附,影響本底,羧基磁珠偶聯鏈霉親和素,總會有很高的本底,是不是磁珠本身封閉不好的原因,很多時候,也有對鏈霉親和素進行預處理的。
價格:目前來說,國外價格會貴一些,國產代替正當時,國產磁珠物美價廉,使下游產品更具競爭優勢。
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