食品合成著色劑，也稱為合成食用色素，是通過化學(xué)合成工藝生產(chǎn)的，用于給食品著色的物質(zhì)。這些著色劑能增強(qiáng)食品的色彩，提高食品的感官吸引力，使食品更加誘人。合成食用色素的使用受到嚴(yán)格的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的約束。在國內(nèi)，食品添加劑的使用需遵循《食品安全法》及相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)，睿科集團(tuán)依據(jù)GB 5009.35-2023《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》，采用WAX混合型弱陰離子固相萃取柱，整理歸納了全套的解決方案，適用于多基質(zhì)的檢測應(yīng)用。

固相萃取：Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀

氮?dú)獯蹈裳b置：Auto EVA80高通量全自動(dòng)平行濃縮儀

高效液相色譜：（HPLC）Agilent 1260

固相萃取柱：RayCure WAX ，150mg/6mL，30支/盒（RC-204-72823N）

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線配置

分別取濃度為50μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液4μL、10μL、20μL、40μL、100μL于2mL進(jìn)樣瓶中，用水稀釋至1mL，搖勻，得到標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。濃度分別為0.2ug/mL、0.5ug/ml、1.0ug/ml、2.0ug/ml、5.0ug/ml。

2.2 樣品提取

準(zhǔn)確稱取試樣2g（精確至0.001g），置于50 mL具塞離心管中，先加入適量水（2 mL-5 mL），50 ℃水浴加熱混勻樣品，加入25mL乙醇氨水溶液，渦旋1min，50℃超聲或振搖（速率≥250r/min）提取20min，8000r/min離心5 min，取上清液置于50mL容量瓶中，每次加入約5 mL-10 mL乙醇氨水溶液重復(fù)提取操作至上清液無明顯顏色，離心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL，即得提取液。準(zhǔn)確吸取提取液10mL，50℃氮?dú)鉂饪s至3mL左右，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，作為待凈化液。

2.3 固相萃取凈化條件

(1) 活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化固相萃取柱

(2) 上樣：活化后立即將提取后的待凈化液以2s-3s/滴的流速加載固相萃取柱上

(3) 淋洗：依次用6mL2%甲酸水溶液和6mL甲醇淋洗合成著色劑專用固相萃取柱，棄去淋洗液

(4) 吹干：抽干柱體

(5) 洗脫：用6mL2%-5%氨化甲醇溶液洗脫，分兩次加入，每次3mL，流速低于2s-3s/滴，收集洗脫液

(6) 氮吹：于50℃氮?dú)鉂饪s至近干

(7) 復(fù)溶：準(zhǔn)確加入2mLpH=9的乙酸銨溶液溶解。溶液用0.45μm水系針筒過濾器過濾，棄去2-5滴初濾液，收集后續(xù)濾液作為待測液

3.1色譜柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm，或同等性能色譜柱

3.2 進(jìn)樣量：10μL

3.3 柱溫：30 ℃

3.4 二極管陣列檢測器波長范圍：400nm-800nm，檢測波長：

415nm(檸檬黃、喹黃)

520nm(新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅和赤蘚紅)

610nm(靛藍(lán)、亮藍(lán))

3.5 參考洗脫梯度見表1，其中流動(dòng)相A為20mmol/L乙酸銨溶液，流動(dòng)相B為甲醇

表1 參考洗脫梯度表

3.6 譜圖

圖3為415nm，520nm，610nm波長下，11種合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)品（1μg/mL）譜圖

為了驗(yàn)證該方法的回收率，本實(shí)驗(yàn)向冰紅茶飲料樣品（2g）中加入上述11種食品中合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)品（200μL，50μg/mL），進(jìn)行加標(biāo)回收驗(yàn)證。測試結(jié)果如下表所示。11種食品中合成著色劑的回收率在71.96-98.94%之間，RSD 值在0.39-6.15%之間。

表2 冰紅茶飲料中11種合成著色劑的

加標(biāo)回收率及RSD值（%）