細胞計數(shù)儀對于做動物細胞培養(yǎng)的老師而言，可以算是簡單又常用的分析儀器之一了。但看似簡單的細胞計數(shù)儀，也可能讓使用者為之抓狂。

曾收到一位做工藝開發(fā)的老師反饋，他使用的一款細胞計數(shù)儀三次檢測同一個樣品，每次分析結(jié)果和平均值的偏差都超出正常可接受范圍。
這么簡單的儀器為何會出現(xiàn)這種問題

是否是儀器本身的性能問題

如果您手頭已有細胞計數(shù)儀在使用，如何來判定這款細胞計數(shù)儀的重復性和準確性呢？

根據(jù)《定量細胞計數(shù)方法性能的實驗設計和統(tǒng)計分析（ISO20391-2:2019）》一文中，關(guān)于細胞計數(shù)方法性能判定的實驗設計，建議至少做4個濃度梯度，每個濃度梯度至少做3次重復性測試。我們可以考慮使用該方法來評判手上細胞計數(shù)儀的性能好壞，具體的細胞選擇和樣品制備上可以參考ISO20391-2:2019里面的具體描述。

在此，我們拿Vi-CELL BLU全自動細胞計數(shù)儀和另一款半自動插板式細胞計數(shù)儀分別進行細胞計數(shù)的重復性和準確性的性能評估。

這里檢測用到的是一種腫瘤細胞，按4個濃度梯度稀釋（原液，2倍，5倍和10倍稀釋），并且每個濃度做3組重復性檢測，以下是測試得到的結(jié)果和統(tǒng)計數(shù)據(jù)。

針對同一個樣品的4個不同稀釋倍數(shù)和3組重復性檢測，同時使用半自動細胞計數(shù)儀（通常需要使用細胞計數(shù)板作為載體，同時臺盼藍染色需要手動完成）檢測是怎樣的效果呢？如下表所示是一款半自動細胞計數(shù)儀上檢測得到的數(shù)據(jù)。

由于半自動細胞計數(shù)儀裝機后很久未做過標樣的驗證和校準，所以和全自動細胞計數(shù)儀的測試結(jié)果之間的差異在此不做比較分析。

為了能比較得出這兩臺細胞計數(shù)儀的重復性和準確性的性能水平，我們將每臺儀器3次原液檢測（編號：S3-原液）得到的活細胞密度平均值作為“真值”。那么Vi-CELL BLU得到的“真值”是3.44M，而半自動細胞計數(shù)儀得到的“真值”是3.06M。而其他3個稀釋倍數(shù)下計算得到的平均結(jié)果，都分別和這個“真值”進行比較，并且計算得到相對偏差。

通過分析我們可以看到隨著S3樣品的稀釋倍數(shù)不斷增加，Vi-CELL BLU的活細胞密度平均值偏差也逐漸變大，但都在±10%的偏差范圍內(nèi)。同時每個稀釋倍數(shù)下的3次重復性檢測RSD都小于5%，顯示出良好的測試結(jié)果重復性。

而半自動細胞計數(shù)儀對5倍和10倍稀釋的樣品檢測，3次測試結(jié)果的相對標準偏差已經(jīng)大于10%，并且稀釋10倍的活細胞密度平均值和原液“真值”結(jié)果比較，偏差達到了15.03%。所以，半自動細胞計數(shù)儀的重復性檢測上相對要差很多，并且隨著稀釋倍數(shù)增加，檢測得到的結(jié)果和原液結(jié)果之間的偏差加大。

通過以上這種性能檢測方法，我們可以得出無論是在3次測試的重復性，還是梯度稀釋結(jié)果的準確性，Vi-CELL BLU全自動細胞計數(shù)儀都比半自動細胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢。如果您對自己使用的細胞計數(shù)儀性能感興趣，也可以嘗試用這個方法來檢測判斷。

至于為何Vi-CELL BLU全自動細胞計數(shù)儀在重復性檢測和梯度稀釋的測試準確性上，都比半自動插片式細胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢？下一期的內(nèi)容，我們將針對這個問題為您做具體的介紹。