人elisa試劑盒是常用于生物醫學研究和臨床診斷的實驗工具,其原理基于酶聯免疫吸附實驗,抗體是免疫系統產生的蛋白質分子,可以識別并結合特定的抗原,形成抗原-抗體復合物。Elisa試劑盒通常包含有特異性與目標抗原結合的抗體。分為直接Elisa、間接Elisa、競爭Elisa和間接競爭Elisa等多種類型。
人elisa試劑盒的步驟如下:
1.固定抗原:在試驗板表面上固定抗原。通常將抗原溶液加入試驗孔并孵育,使抗原與試驗板表面結合。
2.阻斷:通過加入一種非特異性蛋白(如牛血清蛋白)來封閉試驗孔表面的未被固定的地方,以防止非特異性結合。
3.添加樣品:加入含有可能存在目標抗原的樣品,樣品中的目標抗原與試板上的固定抗原結合。
4.洗滌:洗滌試板以去除非特異性結合的蛋白質和其他雜質。
5.加入初級抗體:加入與目標抗原結合的初級抗體。初級抗體可以是直接標記的,也可以是未標記的。
6.洗滌:洗滌試板以去除未結合的初級抗體。
7.加入二級抗體:加入與初級抗體結合的二級抗體。二級抗體一般是與酶結合的抗體,如辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)標記的抗體。
8.洗滌:洗滌試板以去除未結合的二級抗體。
9.加入底物:加入一種酶底物,通常為染色底物。該底物可以與酶發生反應,產生可見的顏色變化。
10.反應終止:加入酶反應終止劑,停止底物的反應,并保留底物的顏色變化。
11.測量:使用光譜儀或讀板儀器測量試驗孔中底物的顏色強度,該強度與目標抗原的濃度相關。
通過測量底物的顏色強度,可以確定樣品中目標抗原的含量。人elisa試劑盒的靈敏度高,可以檢測低濃度的抗原,并具有分析簡單、高通量的優點,因此被廣泛應用于醫學診斷和科學研究領域。
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