細(xì)胞培養(yǎng)程序

來源：天津市歐諾儀器儀表有限公司 2011年12月17日 16:51

一、細(xì)胞培養(yǎng)程序：

A、目的：將培養(yǎng)于培養(yǎng)箱中的細(xì)胞進(jìn)行繼代培養(yǎng)，或是因應(yīng)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行分盤。

B、操作程序：

1、實(shí)行注意事項(xiàng) H 中操作前的準(zhǔn)備步驟。

2、將 Flask 自培養(yǎng)箱中取出，于操作臺(tái)中用幫浦及巴斯特滴管抽去所有溶液。

3、用滴管吸取 10 ml PBS 溶液，加入至 Flask 中，以輕微搖晃的方式潤洗細(xì)胞層，之后用相同一支滴管將 PBS 溶液吸取至一干凈燒杯回收廢溶液。

4、拿取一只新滴管，重復(fù)步驟 3。（步驟3、4是為去除原有培養(yǎng)基當(dāng)中的 FBS，以免 FBS 中和酵素的作用，使細(xì)胞壁上的黏附蛋白質(zhì)無法被酵素分解，細(xì)胞會(huì)無法懸浮起來，無法取出細(xì)胞）

5、用一滴管吸取 2 ml 酵素溶液，加入至 Flask 當(dāng)中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 5-10分鐘。

6、用滴管加入 8 ml 新鮮培養(yǎng)基于 Flask 中，混合均勻后可用同一支滴管取出所有溶液，置于一干凈離心管。

7、將離心管放置于離心機(jī)中，以 1500 rpm 離心 5 分鐘。

8、于生物操作柜中，以幫浦與巴斯特滴管抽去上方殘余溶液。

9、此時(shí)視分盤狀況需要，加入適量的培養(yǎng)基，以滴管吸放的方式將沉淀的細(xì)胞重新懸浮起來，將全數(shù)溶液平均分配至分盤的容器當(dāng)中。（需計(jì)算此時(shí)在每個(gè)容器當(dāng)中的量有多少）

10、補(bǔ)充培養(yǎng)基至容器的合適容量。（注意事項(xiàng) B）

11、放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)或是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。至此完成細(xì)胞培養(yǎng)的程序。

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