四甲基偶氮唑鹽[3—(4.5-dimethylthiazol-2-Y1)-2,5-diphenyltetmzolimnbromide,MTF)在活細胞線粒體的琥珀酸脫氫酶作用下,被還原成藍黑色的MTr-甲脂,形成MTr-甲鐕的量與細胞增殖程度呈正相關。故通過測定細胞形成MTF-甲鐕量,可間接定量分析細胞的增殖情況,具體步驟如下:
(1)用PBS溶解MTT為5mg/mL,用0.22/zm膜濾器除菌及雜質。
(2)加MTF至培養的細胞及IL-1樣品中,10uL/孔,37~C溫育4ho
(3)于每孔加酸化異丙醇100t~L/孔,充分混勻以溶解底物。酸性條件使培養液中酚紅指示劑變為黃色,以利于對MTr-甲脂轉化物的測定。
(4)將微量測定板置室溫數分鐘,保證轉變的底物結晶被溶解。
(5)置酶標儀,調整檢測波長為570nm,參考波長為630nm。測定應在酸化異丙醇加入后1h內完成。
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