美國是生命科學技術發(fā)達的國家,實驗動物資源在其中發(fā)揮了重要的支撐作用。近50年來,美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)通過其下屬的美國國家研究資源中心(NCRR)對實驗動物資源、設施等進行了大規(guī)模的建設,形成了齊全的從昆蟲、水生生物、嚙齒類到非人靈長類等實驗動物資源體系。在美國有1300個有關實驗動物工作的生產與研究單位。實驗動物工作已形成為一個專業(yè)化、規(guī)格化、商品化和社會化的科研和經濟體系。
NCRR是NIH下屬的一個非營利機構,以項目資助的方式管理美國研究資源。美國NIH和其名下的比較醫(yī)學部或實驗動物中心多沒有隸屬關系,只是要從NIH獲取資助就要服從NIH的管理。NCRR有個比較醫(yī)學部(DCM),負責資助個人或研究機構以促進這些資源單位為生物醫(yī)學研究提供高質量、無疾病的健康動物或特殊動物。NCRR經過50年的發(fā)展,資助開發(fā)了200種26000個品系的實驗動物資源,包括:嚙齒類動物、非人靈長類動物、脊椎動物、魚類動物、生物材料及相關生物信息等。2011年,由于美國經濟不景氣,NCRR光榮地完成歷史使命,被國家轉化科學促進中心(NCATS)替代。
相對于歐洲而言,美國實驗動物使用情況并不透明。有人估計美國每年實驗動物使用量在2000萬只以上。美國《動物福利法》和《實驗動物福利法》要求美國農業(yè)部定期檢查實驗用貓、狗和非人類靈長類動物的使用情況(不包括嚙齒類動物、魚類和鳥類)。美國動物福利組織(PETA)在2014年的調查發(fā)現(xiàn)NIH資助的25個主要機構,實驗動物用量在過去15年間增加了73%,這主要是小鼠、大鼠的使用量。
(1)嚙齒類實驗動物資源
嚙齒類實驗動物包括小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、倉鼠等,是常用的實驗動物,占總數(shù)的90%以上。嚙齒類實驗動物在生命科學和醫(yī)藥研究中發(fā)揮核心作用,可以轉化為人類疾病的治療方法。特別是小鼠,與人類遺傳基因上許多共同之處,常用于開發(fā)、生理、行為、疾病和基因工程技術等方面研究。基于嚙齒類動物模型,科學家們發(fā)現(xiàn)了許多重要的生物醫(yī)學成果,推動了人類健康發(fā)展。下表列舉了美國嚙齒類實驗動物資源中心(表1)。
表1 美國嚙齒類實驗動物資源中心一覽表 | ||
資源單位 | 承擔機構 | 資源種類 |
突變小鼠資源中心(Mutant Mouse Regional Resource Centers) | 包括杰克遜實驗室、密蘇里大學、加利福尼亞大學、北卡羅來納大學等。是一個信息庫,多個不同國家的中心的整合信息 | 32776個小鼠品系,包括活體小鼠3856個,ES細胞系28920個 |
誘發(fā)突變小鼠資源(Induced Mutant Resource) | 杰克遜實驗 | 304種化學誘變小鼠品系 |
國家無菌嚙齒類動物資源中心(National Gnotobiotic Rodent Resource Center) | 北卡羅來納大學 | 無菌、悉生、SPF小鼠、大鼠、斑馬魚等20 多種。小鼠品系包括129S6/SvEv、BALB/C、C57BL/6J、Swiss、CD和部分轉基因動物 |
鹿鼠遺傳資源中心(Peromyscus Genetic Stock Center) | 南卡羅萊納大學 | 10種野生型鹿鼠和20 種突變型鹿鼠。用于生態(tài)學、遺傳學、生物進化、疾病和行為學研究 |
特殊小鼠品系資源(Special Mouse Strains Resource) | 杰克遜實驗室 | 249個特殊品系,包括重組近交系(199)和染色體置換系(50) |
大鼠資源研究中心(Rat Resource and Research Center) | 包括密蘇里大學、密歇根大學和德克薩斯大學等 | 300多種大鼠品系 |
Cre條件敲除品系資源 | 杰克遜實驗室 | Cre品系,Cre reporter品系,loxPflanked(floxed)品系 |
(2)非人靈長類實驗動物資源
非人靈長類動物是生物醫(yī)學研究中常用實驗動物。美國NIH 資助開發(fā)非人靈長類動物(NHP)人類疾病模型,提供基礎設施和專業(yè)知識,并促進NHP在生物醫(yī)學研究各個領域應用以及提高動物福利等。美國有8個非人靈長類實驗動物中心,還有若干實驗基地(表2),其NHP資源。
表2 美國非人靈長類實驗動物資源中心一覽表 | |||
資源單位 | 承擔機構 | 資源種類 | 研究領域 |
加利福尼亞國家靈長類研究中心(California National Primate Research Center) | 加利福尼亞大學 | 5300只恒河猴和56只南美伶猴 | 傳染病、生殖和發(fā)育、神經疾病、肺疾病、、認知行為等 |
新英格蘭國家靈長類研究中心(New England National Primate Research Center,注:已關閉) | 哈佛大學醫(yī)學院 | 9種1700多只猴,包括1000多只恒河猴,其他舊大陸猴,及新大陸猴,包括狨猴、松鼠猴、絹毛猴 | 艾滋病、癌癥、藥物成癮、精神疾病、神經退行性疾病等 |
俄勒岡國家靈長類研究中心(Oregon National Primate Research Center) | 俄勒岡州大學 | 3800只恒河猴,335只日本雪猴,10只長尾黑顎猴,9只狒狒和85只食蟹猴 | 生殖和發(fā)育學、神經科學、病理學和免疫學、代謝性疾病、干細胞治療、衰老等研究 |
西南國家靈長類研究中心(Southwest National Primate Research Center) | 西南大學 | 3200只猴,包括1600只狒狒,其他為SPF恒河猴、狨猴和絹毛猴。還有160只黑猩猩 | 慢性疾病、傳染病和生物防御、發(fā)育和老化等 |
圖蘭國家靈長類研究中心(Tulane National Primate Research Center) | 圖靈大學 | 5000只猴,包括恒河猴、食蟹猴、狒狒(5種)、綠猴、松鼠猴、白眉猴(5種)、赤猴、豚尾猴 | 傳染病和再生醫(yī)學研究,包括艾滋病、萊姆病、結核病和生物防御相關產品 |
華盛頓國家靈長類研究中心(Washington National Primate Research Center) | 華盛頓大學 | 3000只猴,包括食蟹猴、恒河猴、松鼠猴、豚尾猴 | 艾滋病相關疾病、系統(tǒng)生物學、神經科學、生殖和發(fā)育學、新發(fā)傳染病等 |
威斯康辛國家靈長類研究中心(Wisconsin National Primate Research Center) | 威斯康辛大學 | 3000只猴,包括恒河猴、食蟹猴和狨猴 | 全球傳染病(GID)、再生和生殖醫(yī)學(RRM)、能量代謝和慢性疾病(EMCD)、神經科學 |
耶基斯國家靈長類研究中心(Yerkes National Primate Research Center) | 耶基斯大學 | 3400只猴,包括恒河猴、白眉猴、松鼠猴、食蟹 猴,還有黑猩猩 | 微生物和免疫學、神經行為學和精神疾病、發(fā)育和認知神經科學、神經藥理學和神經疾病 |
加勒比靈長類動物研究中心(CPRC) | 波多黎各大學醫(yī)學院 | SPF猴 | 社會和性行為,群體遺傳學、生殖生物學、藥理學、功能形態(tài)和自發(fā)疾病和恒河猴寄生蟲 |
狒狒研究資源(Baboon Research Resources) | 俄克拉荷馬大學健康科學中心 | 不同年齡段的狒狒及SPF狒狒 | 狒狒相關生物醫(yī)學、行為學研究,疾病動物模型 |
松鼠猴繁殖和研究資源(Squirrel Monkey Breeding and Research Resource) | 安德森癌癥中心熱帶靈長類中心 | 450 個不同年齡段的松鼠猴 | 行為研究、生殖內分泌學、醫(yī)學靈長類動物學、遺傳學 |
長尾黑顎猴研究中心(Vervet Research Colony) | 維克森林大學醫(yī)學院 | 每年提供100只長尾黑顎猴,包括SPF猴 | 代謝性疾病、理學、生殖生物學研究 |
(3)其他脊椎和無脊椎動物資源
包括酵母、果蠅、線蟲、四膜蟲、海兔、豬、蟾蜍等資源(表3),以及使用這些動物開發(fā)的動物模型、基因工程動物、干細胞、細胞系或遺傳資源、計算機建模等。
表3 美國無脊椎實驗動物資源中心一覽表 | ||
資源單位 | 承擔機構 | 資源種類 |
果蠅資源中心(Bloomington Drosophila Stock Center) | 印第安納大學 | 果蠅41000個品系 |
果蠅基因組學資源中心(DGRC) | 印第安納大學 | 100萬以上的細胞克隆 |
線蟲遺傳資源中心(Caenorhabditis Genetics Center,CGC) | 明尼蘇達大學、愛因斯坦醫(yī)學院 | 線蟲11273株 |
國家海兔資源中心(National Resource for Aplysia) | 邁阿密大學 | 海兔10000多個 |
國家嗜熱四膜蟲資源中心(National Resource for Cephalopods) | 康奈爾大學 | 多種嗜熱四膜蟲 |
國家豬資源研究中心(National Swine Resource & Research Center) | 密蘇里大學 | 杜洛克、長白豬等10個品系和16個轉基因品系。 |
國家蟾蜍資源中心(National Xenopus Resource Center | 海洋生物研究所 | 25個非洲爪蟾品系,提供近交系、突變系和轉基因爪蟾。 |
(4)水生實驗動物資源
包括斑馬魚、其他魚類、海洋鼻涕蟲等水生動物、疾病模型和相關生物材料。水生實驗動物生殖周期短,卵透明,常用于發(fā)育生物學、行為學、人類疾病和功能基因組學研究。俄勒岡州大學斑馬魚國際資源中心擁有斑馬魚13161個品系。德克薩斯州大學的劍尾魚遺傳資源中心擁有劍尾魚23種,65個品系。
(5)其他資源
美國其他生物材料資源中心,包括基因分析資源、信息資源、獸醫(yī)資源與試劑、生物材料資源等。德州農工大學醫(yī)藥學院健康科學中心再生醫(yī)學研究所擁有數(shù)千種成人間充質干細胞資源。美國疾病研究交換所(NDRI)擁有人體組織和器官資源,每年提供4000多份樣本給癌癥、傳染病、心臟病、毒理和等研究機構。德州農工大學Kingsville 自然毒素研究中心構建了毒蛇資源中心,擁有29種450多條毒蛇,提供蛇的毒液、腺體、皮膚、血液和器官用于毒物研究。
美國的實驗動物資源在美國國內實現(xiàn)了很高程度的共享,同時也輻射到了歐洲。實驗動物資源研究一直是發(fā)達國家的關注的重點之一,不僅有研制、培育途徑,還有購買、引進或掠奪等多種途徑;不僅作為實驗動物資源,也作為物種資源加以保存、培育和利用;對生命科學、醫(yī)藥等起到了極大的支持作用。而歐洲采用多國合作、集中研制的形式,也在基因工程動物資源方面占領了一席之地。以英國劍橋大學Sanger研究所牽頭,德國和美國參與,總投入2億英鎊左右,建立了新一代的基因工程修飾小鼠胚胎干細胞資源庫。采用集中大規(guī)模研制模式,目前劍橋大學Sanger研究所已經有近20000種新一代基因敲除小鼠胚胎干細胞庫。其大規(guī)模、高效率的研究模式,具中國效仿價值。
國外實驗動物質量控制級別越來越高,規(guī)模化生產便于實現(xiàn)實驗動物的質量控制。近交系、SPF級、基因工程動物等數(shù)量逐漸增加,普通動物越來越少。由于實驗動物生產和供應方面產業(yè)化程度較高,為了保證實驗動物的質量,在競爭激烈的市場上處于有利位置,各個企業(yè)都制訂有自己的企業(yè)標準。比如大的實驗大鼠、小鼠商品化生產、銷售公司——Charles River制定的標準在全球實驗動物領域內得到基本認同,具有一定的代表性。以英國劍橋大學桑格研究所牽頭,德國和美國參與,總投入兩億英鎊左右,建立了新一代的基因工程修飾小鼠胚胎干細胞資源庫,在未來幾年內將完成兩萬以上基因敲除。
其中,英國是目前世界上實驗動物統(tǒng)計數(shù)據(jù)最準確的國家之一。1940年只有約100萬只動物用于科學研究,但1960年的數(shù)量增加到350萬只,1971年達到560萬只,幾年后仍然保持在550萬只左右。自1980年以來,這一數(shù)字顯著下降,2001年降至262萬,不到1970年使用量的一半。近年來,英國的實驗動物數(shù)量有所增加,在2012年增加到411萬,比2001年增加了57%。越來越多的實驗動物用量帶給時任英國首相大衛(wèi)卡梅倫聯(lián)合政府很大的壓力(2010-2016)。
根據(jù)用于科學研究的動物物種紀錄,超過70%的實驗動物是嚙齒動物。2000年,英國五大廣泛使用的實驗動物是小鼠、大鼠、魚類、鳥類和豚鼠,分別占總數(shù)的59.2%、19.7%、9.0%、4.6%和2.6%。2001年,嚙齒動物占英國研究動物的82%;魚、兩棲動物、爬行動物和鳥類占14%;小型哺乳動物(嚙齒動物除外)占2.3%;大型哺乳動物占1.3%;狗貓占0.4%;和非人類靈長類動物占0.1%。2014年,常用的動物是小鼠、魚類、大鼠、鳥類、其他動物和受特別保護的動物,分別占總數(shù)的60%、14%、12%、7%、6%和1%。
由2016年英國使用實驗動物物種統(tǒng)計數(shù)據(jù)(Annual Statistics of Scientific Procedures on Living Animals Great Britain,2016)顯示,英國共使用了393.6萬只實驗動物(表1.3-1)。其中,使用最多的為小鼠約72.8%(286.6萬只),其次為魚類約13.6%(53.5萬只),之后依序為大鼠約6.3%(24.9萬只)、鳥類約3.8%(15.1萬只)、其它約3%(13.3萬只),另外受特別保護的物種(specially protected species)的使用,主要是馬(8900個計劃)、狗(4,900個計劃)、非人類靈長類動物(3600個計劃)和貓(190個計劃)。比較2016年和2015年的物種,在使用數(shù)量上有顯著變化,除了豚鼠(guinea pigs)增加20%(4400只)至26000只(與2014年數(shù)量相當),家禽增加9%(12000只)至138000只,兔子增加9%(1300只)至15000只,綿羊增加3%(1300只)至48000只外;其它動物如大鼠,則減少7%(19000只)至239000只,與2014年的數(shù)字相當,小鼠則減少4%(49000只)至122萬只;在魚類總體減少2%(7000只)至287000只,其中斑馬魚使用的數(shù)量增加了28%(42000只),“其他魚類”的使用則減少了34%(49000只)。
值得注意的是,從2007年至2016年在英國前三大使用的實驗動物(小鼠、大鼠及魚類)使用數(shù)量變化,顯示英國在3Rs觀念的倡導下,此三種實驗動物使用數(shù)量確實有逐年減少的趨勢(圖 1)
圖1 2007年至2016年英國使用小鼠、大鼠和魚類作為實驗動物數(shù)量的變化
資料來源:Annual Statistics of Scientific Procedures on Living Animals Great Britain,2016
另外,分析實驗動物在進行實驗時其遺傳的狀態(tài)為基因改變動物(genetically altered animals)或非基因改變動物(not genetically altered animals)的比例,顯示2016年在英國約有729000個實驗動物涉及改變基因,此數(shù)量比2015年增加1%(9600只),持續(xù)過去9年的增長趨勢。且較2007年以來使用改變基因動物進行試驗研究的數(shù)目增加了36%(194,000只)。相反的,沒有涉及遺傳改變的動物的數(shù)量自2015年至2016年期間下降了5%至129萬只,繼續(xù)呈下降趨勢,若從2008年高峰的165萬只計算則大約減少21.8%(圖2)。
圖 2 2007年至2016年,英國實驗動物在進行實驗時,其遺傳的狀態(tài)(基因改變過或未經過基因改變)
資料來源:Annual Statistics of Scientific Procedures on Living Animals Great Britain,2016
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