mRNA 或信使 RNA 是由核糖體翻譯用于蛋白質合成的單鏈 RNA 模板。雅各布和莫納德創造了“信使RNA”一詞。它是一條長聚合物鏈,由通過磷酸二酯鍵共價連接的核苷酸組成。它含有四個含氮堿基,腺嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶和鳥嘌呤。RNA 和其中一條 DNA 鏈是互補的,但在 DNA 中,尿嘧啶取代了胸腺嘧啶。
成熟的 mRNA 由以下區域組成:5' 帽、5' UTR、編碼區、3' UTR 和 poly(A) 尾部。
編碼區域:它是一串密碼子,即核苷酸的三聯體。每個密碼子都編碼一個特定的氨基酸,該氨基酸通過核糖體翻譯成多肽鏈中的氨基酸。編碼區的起始密碼子是“AUG”,并以任何終止密碼子結尾,即 UAA、UAG 或 UGA。編碼序列的一部分可能具有調節功能。
未翻譯區域 (UTR) 分別位于編碼區域之前和之后的 5' 和 3' 區域。未翻譯區域存在于起始密碼子之前和終止密碼子之后。它們參與基因表達。它們在 mRNA 定位、翻譯和 RNA 穩定性中也起著至關重要的作用。
5' Cap- 甲基鳥苷三磷酸帽存在于 5' 端。
Poly(A) Tail-A 聚腺苷酸尾巴位于 3' 端。
在大多數真核生物中,當 mRNA 編碼一種蛋白質時,mRNA 的編碼區被稱為單順反子。在原核生物中,大多數 mRNA 編碼一種以上的蛋白質;這稱為多順反子。這些蛋白質大多具有相關功能,并由具有啟動子和操作子區域的單個調控區調控。在人類中,線粒體基因組是多順反子的。
mRNA 的合成 – 轉錄和加工
轉錄是從 DNA 合成 mRNA 的過程。
在原核生物中,所有類型的 RNA 都由單個 DNA 依賴性 RNA 聚合酶轉錄。在這里,不需要 mRNA 處理;因此,轉錄和翻譯可以耦合,因為這兩個過程都發生在胞質溶膠中。
在真核生物中,RNA 聚合酶 II 轉錄前 mRNA。Pre-mRNA 或主轉錄本隨后在細胞核中進一步轉化為 mRNA。它被稱為hnRNA,或異質核RNA。然后將成熟的 mRNA 轉移到胞質溶膠中進行翻譯后處理。
轉錄
從 DNA 合成 RNA 稱為轉錄。以DNA為模板,DNA依賴性RNA聚合酶在5'至3'方向上合成RNA。極性為 5' 至 3' 的 DNA 鏈稱為“編碼鏈”,而極性為 3' 至 5' 的 DNA 鏈則稱為“模板鏈”。轉錄RNA的核苷酸序列與編碼鏈匹配。
DNA 中的轉錄單元由三個主要區域組成,所有參考都與編碼鏈有關:
啟動子存在于結構基因的 5' 末端。
啟動子和終止子之間存在結構基因。
終止子存在于結構基因的 3' 末端。
轉錄的三個步驟如下:
起始:RNA聚合酶通過與啟動子區域結合開始轉錄,進一步啟動DNA雙螺旋解旋。
外延:RNA聚合酶將互補的三磷酸核苷作為底物添加到鏈中,并且隨著DNA雙螺旋的廣泛開放而繼續延伸。RNA 轉錄發生在 5' 到 3' 方向。
終止:轉錄停止,mRNA 從 RNA 聚合酶中分離。
加工
HnRNA,即新生成的 mRNA 或初始轉錄本,必須經過處理才能成為成熟的 mRNA。HnRNA 經過轉錄后處理以產生成熟的 mRNA。功能性 mRNA 進一步從細胞核轉運。翻譯或蛋白質合成發生在細胞質中。
外顯子和內含子都存在于 hnRNA 中。轉錄后修飾包括剪接、加帽和拖尾。
剪接:該過程涉及從成熟的mRNA鏈中切除內含子。
加帽:在這里,在hnRNA的5'端添加核苷酸帽,即甲基鳥苷三磷酸。
拖尾:該過程處理在 3' 端添加 200-300 個腺苷酸殘基。poly(A) 尾部保護 RNA 免受核酸外切酶降解,還參與轉錄終止、mRNA 轉運和翻譯。
核孔復合物在hnRNA加工后將功能齊全的mRNA轉運到細胞質中,在那里它被翻譯成多肽鏈。
mRNA的類別:
報告基因mRNA:這些 mRNA 類似于*全加工、加帽和多聚腺苷酸化的 mRNA,并準備好通過核糖體進行翻譯。大多數報告基因 mRNA 可未經修飾或用 5-甲氧基尿苷修飾,以減少先天免疫反應。研究轉染效率的理想對照。
基因組編輯 mRNA:基因組編輯,也稱為基因編輯,是指能夠修飾生物體 DNA 的一系列科學技術。在基因組中的特定位點,這些技術有助于添加、去除或修飾遺傳物質。已經開發了幾種基因組編輯方法。CRISPR-Cas9 代表成簇的規則間隔短回文重復序列和 CRISPR 相關蛋白 9,是一個眾所*知的例子。CRISPR-Cas9 是一種天然存在的基因組編輯系統,細菌將其作為免疫反應進行部署。
疫苗 mRNA:mRNA 疫苗使用一種稱為 mRNA 的分子的拷貝來非法產生免疫反應。該疫苗將抗原編碼的mRNA輸送到免疫細胞中,免疫細胞使用設計的mRNA作為藍圖來構建通常由病原體(如病毒)或癌細胞產生的外來蛋白質。這些蛋白質分子激活適應性免疫反應,指示身體識別和消除相關的病原體或癌細胞。mRNA通過封裝在脂質納米載體中的mRNA的納米制劑給藥,其保護RNA鏈并促進其吸收到細胞中。
基因替代 mRNA:mRNA在基因替代中的應用相當流行。許多蛋白質,包括膜結合的蛋白質、細胞內蛋白質或經過翻譯后修飾或加工的蛋白質,不能被外源性蛋白質遞送所取代。細胞內 mRNA 表達大大增加了可通過蛋白質替代治療的適應癥數量。分泌的人促紅細胞生成素 (EPO) 蛋白可以使用酶聯免疫吸附試驗在血清中輕松檢測。血細胞比容測定可用于確定EPO對紅細胞產生的刺激程度。
熒光 mRNA:Cy5 GFP mRNA:Cy5 GFP mRNA被設計用于產生高表達水平的綠色熒光蛋白。它可用于控制轉染效率。當用 Cy5 標記時,可以很容易地追蹤 F-Luc mRNA,以分析 mRNA 的遞送和翻譯效率。
編程為自毀
MRNA是細胞的中間信使,是一種重要的安全機制。任何位于細胞外的RNA都會立即被稱為RNase的酶破壞,從而防止入侵者利用細胞機制制造外來蛋白質。這些酶在識別 RNA 編碼中的結構和 U 后破壞信息,保護細胞免受錯誤指令的影響。通過根據需要“打開”或“關閉”藍圖,mRNA還為細胞提供了一種調節蛋白質合成速率的方法。信使RNA的指令定時過期。代碼中的 U、單鏈形式、核糖和 mRNA 的獨*序列都有助于其較短的半衰期。所有這些特征共同作用,使信息能夠被“讀取”,翻譯成蛋白質,然后對于一些需要嚴格監督的蛋白質,在幾分鐘內迅速銷毀,對于其他蛋白質,則長達幾個小時。一旦指令消失,蛋白質生產就會停止,直到蛋白質工廠收到新的信息。
功能與應用
mRNA的主要作用是充當蛋白質生產的模板。位于細胞質中游離或附著在粗糙內質網上的核糖體可以進行翻譯 (RER)。
RNA 中存在的遺傳信息被翻譯成多肽鏈中存在的氨基酸。多肽鏈中氨基酸的順序由 mRNA 中的核苷酸或密碼子序列決定。每個三重密碼子或三核苷酸序列僅編碼一種特定的氨基酸。多個密碼子可用于編碼氨基酸。密碼子不重疊。
mRNA 指導細胞合成蛋白質。修飾的mRNA序列的施用可用于治療疾病,也可以用作疫苗。輝瑞-BioNTech 和 Moderna 疫苗是 mRNA 疫苗的兩個例子,它們已被批準限制使用,并且正在開發用于對抗 COVID-/19 感染。
OZ Biosciences 提供廣泛的 mRNA,這些 mRNA 模擬*全加工的成熟 mRNA。這些 mRNA 通過使用 5' cap-1 結構和 3' poly(A) 尾部來穩定它們,從而針對穩定性和性能進行了優化。它們用 5-甲氧基尿苷(5moU 取代 U)或 N1-甲基假尿苷 (N1-mψ) 修飾以減少先天免疫反應。我們還提供未經修飾的 mRNA。
以下是即用型mRNA的類別:
報告基因mRNA:研究轉染效率的理想對照
基因組編輯 mRNA:Cas9 mRNA 用于 CRISPR 基因組編輯
疫苗mRNA:非常適合作為免疫或疫苗研究的對照
基因替代 mRNA:EPO mRNA的
熒光 mRNA:Cy5 GFP mRNA、Cy5 GFP mRNA
我們提供微克到多克級的定制 mRNA,從幾百個堿基到幾千個堿基不等,具有多種修飾,包括帶帽的 5' 末端修飾、內部修飾(如 5-甲氧基尿苷(可提供其他修飾核苷酸))和 3' 修飾(如 poly-A 尾)。可使用 Cy5、Cy3 或其他選項進行熒光標記。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。