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酶標儀在植物領域的應用總結

來源:迪圖(上海)生物科技有限公司   2023年09月20日 13:29  

一、簡介 

在基于哺乳動物細胞的研究中,酶標儀主要應用于: (1) 常規分子檢測,如核酸、蛋白濃度及酶活性分析等;(2) 信號轉導研究, 如一些細胞信號事件如 ROS,修飾的檢測;(3) 整體細胞水平的分析,如細胞的活力、凋亡和殺傷等。然而在植物領域中,酶標 儀的應用則偏向前兩個方向,此外,植物領域的酶標儀應用普遍度也不及動物,但這并不限制酶標儀在該領域的應用前景。在此, 我們結合常見的應用案例介紹酶標儀在植物領域中的應用,提升酶標儀在植物研究中的應用價值,并進一步協助植物的科研發展。 

二、利用酶標儀進行常見的分子檢測和分析 

在植物領域中一些基礎的分子檢測,如基于紫外吸收或熒光的 DNA,RNA 和蛋白定量及純度分析等,都可以用酶標儀進行 高通量檢測。由于原理和應用類型與研究哺乳動物細胞類似,在此就不贅述了,大家有需求可參考我們針對核酸定量的應用材料。 在此我們主要列植物領域中比較特色的幾個案例。 

2.1 吸收峰和熒光光譜分析 

植物領域中通常會涉及到對一些感興趣的化合物,如色素等的物理指標分析,其中就包括吸收峰分析和針對具有熒光特質的 化合物進行熒光光譜分析。通常這些分析會由分光光度計完成,但會受到通量和曲線分析能力的限制。現階段大部分 Molecular Devices 推出的配備光柵的酶標儀如 M 系列和 iD 系列都支持出色的光譜掃描分析,包括全波長光吸收和熒光光譜掃描,步進可精 確至 1 nm,可應對常見的光譜分析需求,并極大提高通量。同時配備的 SoftMax Pro 軟件可自動分析光譜圖簡化處理流程。

基于光譜掃描還可用于進一步分析具有調節熒光能力的蛋白功能,如藍藻細菌中的 Orange Carotenoid Protein (OCP) 在強 藍-綠光下會和藻膽 ( 蛋白 ) 體 (PBS) 相互作用來保護細胞。實驗中可觀察到 OCP 的引入可降低 PBS 的熒光發射強度。對于新發現 的 OCP 家族成員,我們就可以通過熒光光譜掃描功能確認其是否會淬滅 PBS 的熒光 ( 圖一 )。結果發現相較于已知的 OCP1,新 發現的 OCP2 具有較弱的熒光淬滅能力 ( 圖一,來源于文獻 Nat Plants. 2017 Jul 10;3:17089. )。


2.2 酶活分析

在植物研究中,酶活分析也是常見的檢測之一,主要用于探究植物本身酶的功能和植物提取物對各種酶活性的影響。基于底 物工作機制的不同,酶活可用光吸收法和熒光法檢測。例如圖二就展示了多種植物的提取物對參與血糖調控的 α-淀粉酶 (α-amylase) 和 α-葡萄糖苷酶 (α-glucosidase) 活力的抑制 ( 來源于文獻:J Agric Food Chem. 2012 Sep 12;60(36):8924-9.)。其中,α-淀粉酶 的活力檢測是基于使用自身淬滅的 DQ™ starch 熒光底物。隨著底物在酶的作用下發生降解,進而發出熒光,并可通過熒光強度 的變化分析酶活。而 α-葡萄糖苷酶活性的檢測則基于其底物光吸收屬性在酶處理下的變化。


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