近年來,羊奶市場規模不斷上升,開發了品種繁多的羊奶產品,其中羊奶粉是銷量的產品。在原料中摻入牛乳成分是常見的方式,因為牛乳成分相似,成本低,而且容易獲得。近年來,在羊奶及其乳制品的多次抽樣調查中發現摻假現象。摻假不僅侵犯了消費者的利益,而且還可能引起食物過敏。因此,開發一種快速檢測羊奶粉摻假的方法十分重要。
華南農業大學的沈興課題組聯合艾迪基因在《Foods》上發表了題為“A Rapid RPA-CRISPR/Cas12a Detection Method for Adulteration of Goat Milk Powder”的文章,影響因子5.561,本研究建立了一種快速的RPA-CRISPR/Cas12a定性檢測牛源性成分摻假羊奶粉的方法。
本研究采用CRISPR/Cas12a檢測系統結合重組酶聚合酶擴增(RPA)技術對羊奶粉中牛源性成分的摻假進行定性檢測。設計篩選特異性引物和crRNA。在對RPA和Cas體系進行優化后,建立了RPA- crispr /Cas12a檢測方法。該檢測無需大型設備輔助,可在45分鐘內完成牛源性成分的快速鑒定。
RPA-CRISPR/Cas12a法對牛基因組DNA的檢出率可達10?2 ng/µL,對牛奶粉的檢出率可達1% (w/w),可滿足現場檢測的檢測要求。
真實樣品測試:共收集55種市售羊奶粉產品進行盲測。結果顯示,27.3%的樣品中摻入了牛成分,顯示出羊奶粉市場摻假情況嚴重。
總結:本研究建立了一種快速的RPA-CRISPR/Cas12a定性檢測牛源性成分摻假羊奶粉的方法。該方法的檢出限能很好地滿足食品監測的要求,同時保持了較高的特異性。通過對55種市售山羊奶粉產品的小范圍調查,發現目前山羊奶粉摻假情況嚴重。因此,本研究建立的RPA-CRISPR/Cas12a檢測方法非常適合用于羊奶中牛源性成分的現場快速檢測,可為打擊摻假羊奶食品造假提供可靠的技術參考。
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