在細(xì)胞培養(yǎng)中,血清的品質(zhì)在一定程度上可以影響到細(xì)胞培養(yǎng)的成敗,如果血清中出現(xiàn)沉淀,不免會讓人擔(dān)心細(xì)胞會不會因?yàn)槌恋矶霈F(xiàn)問題。所以,關(guān)于血清沉淀,小編和大家分享以下幾點(diǎn)內(nèi)容。
一、血清沉淀物到底是什么?
常見的血清沉淀有以下幾種:
纖維蛋白:纖維蛋白是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物,可以達(dá)到1~2mm,可以用肉眼觀察到。由于在生產(chǎn)過程中,血清采集、過濾和罐裝處理都是在低溫條件下快速完成的,血清中的纖維蛋白原處于溶解狀態(tài),但在解凍后,血清中的纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集,形成肉眼可見的沉淀。
磷酸鈣:常見的一種沉淀物,會造成血清渾濁,并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會增加,這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn),這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動看上去可以活動,因此通常會被誤認(rèn)為是微生物污染。
其他:膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)也是血清中出現(xiàn)沉淀的常見原因。
二、血清沉淀物對細(xì)胞培養(yǎng)有什么影響?
血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性,經(jīng)過我們的試驗(yàn)以及細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)表明,血清沉淀物不會影響細(xì)胞培養(yǎng)。
三、血清沉淀物是不是污染?
血清沉淀物中,磷酸鈣往往會被誤認(rèn)為是微生物污染,特別是在37℃條件下培養(yǎng)后,可能會觀察到更多的絮狀沉淀,所以將血清放在培養(yǎng)箱中做無菌試驗(yàn)并不能直接判定血清被污染了。我們可以將血清加到細(xì)菌培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),觀察是否有細(xì)菌生長,也可以進(jìn)行革蘭氏染色,在油鏡下觀察是否有污染。
四、血清沉淀物該怎么去除?
血清中出現(xiàn)沉淀物后,可以將血清分裝到無菌離心管中,以400~600g離心5min,將上清液加入到培養(yǎng)基中一起過濾。注意:不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)檫@很可能會堵塞過濾膜,并且直接過濾血清,也可能會導(dǎo)致血清中部分營養(yǎng)成分的流失。
五、如何避免血清中出現(xiàn)沉淀物?
1、采取正確的解凍方法
(1)2~8℃過夜,使之部分融解
(2)再放到室溫條件下使之融解
(3)在融解過程中需要規(guī)則地?fù)u晃均勻
2、采取正確的使用和保存方法
(1)非必要不滅活,熱滅活會使血清中部分蛋白質(zhì)變性析出,影響血清品質(zhì)
(2)避免在37℃下預(yù)熱血清,在室溫條件下預(yù)熱即可
(3)使用過程中,避免反復(fù)凍融
(4)避免紫外線照射
(5)避免在2~8℃條件下長期保存,可以將血清分裝后在-15~-20℃的環(huán)境中長期保存
(6)避免在室溫條件下放置太長時(shí)間
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