腎上腺和性腺類固醇的尿代謝物分析已經常規進行了大約 30 年，定義了一種在全球范圍內用于研究和臨床診斷的方法，也被擴展到毒理學領域。在臨床上，這種分析已廣泛用于先天性代謝缺陷的診斷，*近還用于腎上腺腫瘤的鑒別診斷. *初，通過氣相色譜 (GC) 和火焰離子化檢測器 (FID) 等檢測器測定類固醇的甲氧基胺-三甲基甲硅烷基衍生物的概況，但*近通過單四極桿質譜儀 (MS) 鑒定了類固醇。MS 的使用增強了 FID 的特異性，但挑戰依然存在。類固醇及其代謝物的數量在分析物和疾病狀態之間差異很大，這意味著校準范圍可能會有很大差異。尤其是一些類固醇的含量較低（例如皮質醇），并且接近可接受的定量限 (LOQ)，即使在提取相對大量 (~20 mL) 的尿液之后也是如此。

使用串聯質譜 (MS/MS) 可以改善信噪比，從而降低 LOQ。*近，液相色譜 (LC)-MS/MS 已成為定量分析的優選方法。由于通常不需要衍生化，因此可以獲得更高的通量。盡管電離效率較差，但一些中性類固醇可以通過電噴霧 (ESI) 和大氣壓化學 (APCI) 電離成功量化，盡管它們的信號容易受到基質離子抑制的影響。盡管如此，更豐富的循環孕烯和雄烯類固醇，如皮質醇和睪酮，現在通常通過這種方式進行量化。然而，它們的代謝產物，其中一些保留了生物活性, 無法使用 LC-MS/MS 輕松檢測或區分。A 環中酮烯醇功能的代謝形成 5α 和 5β 還原的二氫產物，隨后 3-酮被 3α 和 β-羥基類固醇脫氫酶還原并產生離子化不佳的代謝物。此外，LC 對多組立體異構體的分離是有問題的。