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手性色譜柱是由固定在硅膠或其他具有光學活性的聚合物上的單體制成的手性固定相。通過引入手性環境，反映異構體的物理特在映射異構體上，從而達到光學異構體分離的目的。為了實現手性識別，手性化合物分子和手性固定相之間至少有三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級、π-π、靜電、疏水或空間。手性分離是多種相互作用的結果。這些相互作用通過影響嵌入式復合物的形成、特殊位點和分析對象的結合來改變手性分離的結果。由于這種力較弱，需要仔細調整和優化流動相和溫度，以達到較好的分離效果。
根據手性固定相和溶劑的相互作用機制，手性色譜柱的分類體系有：
1、通過氫鍵、π-π作用、偶級-偶級作用形成復合物。
2、既有類型1中的相互作用，又存在包埋復合物。此類手性色譜柱中*型的是由纖維素及其衍生物制成的手性色譜柱。
3、基于溶劑進入手性空穴形成包埋復合物。
4、基于形成非對映體的金屬絡合物，也稱為手性配位交換色譜(CLEC)。
5、蛋白質型手性色譜柱。手性分離是基于疏水相互作用和極性相互作用實現。
在手性拆分中，溫度的影響是很顯著的。低溫增加手性識別能力，但可能引起色譜峰變寬而導致分離變差。因此確定手性分析方法過程中要考慮柱溫的影響，確定*優柱溫。
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