Protein A 和 G 色譜柱對抗體均具有高親和性，因此它們僅結合細胞培養上清液中的抗體。然而，它們的選擇性各有不同。例如，Agilent Bio-Monolith Protein A 色譜柱對人 IgG1、IgG2 和 IgG4 亞型具有高親和力，對 IgG3 沒有親和性，而 Agilent Bio-Monolith Protein G 色譜柱對人 IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4 亞型都具有高親和力。IgG1 憑借其穩定性（半衰期較長）、在血清中的豐度以及較少出現聚集，成為最常用的生物治療藥物。通常不使用 IgG3，因為它容易聚集且不太穩定。相反，Protein G 色譜柱對人亞類單克隆抗體（例如 IgA 和 IgD）沒有親和性，但是 Protein A 色譜柱能夠與這些抗體結合（表 1）。這些色譜柱相互補充，Protein G 對不與 Protein A 結合的 mAb 具有親和性，反之亦然（圖 1）。因此，它們能夠實現目前作為生物治療藥物進行開發的各種 mAb 亞類和片段的滴度測定。

*Protein A 和 G 對不同抗體的相對親和性表示法：++++ = 強親和性，+++ = 中等親和性，++ = 弱親和性，+ = 微弱親和性，- = 無親和性。

親和色譜的樣品前處理方法與 HPLC 蛋白質分析的樣品前處理方法類似。進樣前需要極少的樣品前處理，以優化色譜柱性能并延長色譜柱壽命。

Agilent Bio-Monolith rProtein A（重組 Protein A）分析柱是 Bio-Monolith 和親和色譜家族的新成員。該色譜柱可用于高速分析單克隆抗體 (mAb) 滴度和小規模純化，并可輕松集成到二維液相色譜等其他分析工作流程中。本研究以最大流速測試了重組 Protein A 色譜柱，證明了一種色譜結合/洗脫法可用于測定 mAb 滴度，該方法具有非常短的運行時間（1 分鐘），適用于克隆篩選、工藝開發及優化等高通量應用。

此外，本篇應用文集中還包含使用 Agilent Bio-Monolith Protein A HPLC 色譜柱縮短定量分析人 IgG 的分析周期、使用 Agilent Bio-Monolith Protein A 色譜柱和 LC/MS 進行的細胞培養優化等應用簡報供您查閱。