熒光顯微鏡是利用特定波長的激發(fā)光照射被檢物體產(chǎn)生熒光進行鏡檢的顯微光學觀測技術,是醫(yī)院科研、病理、檢驗等部門常用的醫(yī)用光學儀器之一。有些物質受紫外線照射后可發(fā)熒光,另有一些物質需要用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,可以觀察到普通顯微鏡看不到的細節(jié),大多數(shù)實驗室都有配備高質量或者常規(guī)的顯微成像系統(tǒng),但是調整熒光,校正難度較高,因此需要了解熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式。
按光的波長范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍紫光)兩種。
UV激發(fā)是用短于400nm紫外光進行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光,所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光,容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。
BV激發(fā)是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍光進行激發(fā)。適合使用藍光照射標本,用藍光作為激發(fā)光,熒光色素的吸收效率較高,可得到較明亮的圖像。
BV激發(fā)時要注意以下2點:
①熒光顯微鏡的截止濾光片要使用可*阻斷藍光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片;
②500nm以下的熒光無法看到,而500nm以上會使整個圖像顯黃色。
因此,熒光顯微鏡的照明可根據(jù)聚光器的構造和激發(fā)光的波長按以下三點考慮。
①從熒光像的反差要求來看,UV激發(fā)暗場聚光器照明。
②以像的亮度來考慮,BV激發(fā)濾光片暗場觀察效率很高。
③UV激發(fā)濾光片暗場觀察和BV激發(fā)暗場聚光器照明的特性,可看作介于這兩種照明方法之間,但前者濾光片暗場的性質較強,顯示圖像較明亮,反差小;后者因保留暗場光路的性質,故顯示圖像較暗,而反差有所改善。當實際使用熒光顯微鏡時,應采用合適標本要求的照明法進行觀察。
顯微鏡LED熒光光源是顯微鏡配置的模塊化產(chǎn)品,可代替?zhèn)鹘y(tǒng)汞燈光源,目前市面上集成的熒光成像系統(tǒng)很多,比如品牌公司的整套活細胞成像系統(tǒng),維護成本高,價格昂貴,對于常規(guī)實驗室來說,成本較高,負擔不起。因此我們為常規(guī)實驗室學校等提供了優(yōu)惠簡便的解決方案,通過增加熒光附件,對現(xiàn)有的顯微鏡進行熒光升級,購置成本大大降低,且拆裝簡單快速,通用型附件可以兼容目前市場主流的各大顯微鏡品牌,滿足廣大科研用戶的熒光實驗需求。
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