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紫外可見分光光度計光路系統由脈沖氙燈光源，凹面光柵單色器，反射鏡，狹縫等組成。脈沖氙燈具有瞬時發光強度大、光譜范圍廣、紫外光度強、無需預熱等特點，為后面的檢測快速提供可靠實用的光源信號。脈沖氙燈發出紫外光，經由步進電機帶動的凹面光柵分光系統組成的單色器裝置。經光柵色散分光后的光線，經過半透半反鏡可以將光束一分為二，一束由出射狹縫射出，進入樣品池，另一束作為參考光用于修正光源波動，整個過程同步實現了分光、檢測和基線校正等功能。被吸收后的光信號經光電二極管轉化成相應的電信號，經過AD轉換后再通過無線數據傳輸傳送到上位機進行實時顯示、紫外光度計軟件對其進行存儲并處理。
紫外可見分光光度計工作原理
分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發生了電子能級躍遷而產生的吸收光譜。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。
分光光度分析就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息。可以用標準光圖譜再結合其它手段進行定性分析。
根據Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比；如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對溶液進行定量分析。
將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質，則兩者的光譜圖應*一致。如果沒有標樣，也可以和現成的標準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。
實驗證明，不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。
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