物質本身性質決定,光的波長,溶液濃度,濃度越大,吸光度越大,溶液厚度,越厚,吸光度越大.
1、 受有色物質穩定性的影響；
2、受比色皿潔凈度和配對性的影響；

3、受參比溶液版選擇權的影響；
4、受儀器波長精度的影響；
5、受分光光度計穩定性的影響；
6、受儀器吸光度測定準確性的影響；
7、受檢測人員技術水平的影響；
8、受顯示溶液配制濃度誤差的影響。
　一、樣品的稀釋濃度

    樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為使較大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內，顆粒的干擾相對較小，結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高(超過光度計的測試范圍)。

　二、核酸本身物化性質

　　溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測試時，離子濃度太高也會導致讀數漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩定讀數。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0)，才能得到精確的檢測結果。水的pH值不穩定，可能導致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內存在自身吸收，為了確保準確測量，請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。

　三、分光光度計操作因素

　　1、使用儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。

　　2、儀器應放在干燥的房間內，使用時放置在堅固平穩的工作臺上，室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發亮不穩定。

　　3、在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，不是這種情況可以用電表上的校正螺絲進行調節。

　　4、若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100”點，然后再測量。

　　5、比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。