293T貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染

貼壁細(xì)胞siRNA轉(zhuǎn)染步驟：

1、合成siRNA時(shí)請(qǐng)帶熒光，若siRNA不帶熒光、請(qǐng)使用熒光對(duì)照，方便查看轉(zhuǎn)染效率

2、siRNA濃度：20uM/L

3、siRNA和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物制備：siRNA 8ul和轉(zhuǎn)染試劑8ul，吹打混勻室溫靜置15分鐘，無需另外加入任何試劑稀釋

4、細(xì)胞轉(zhuǎn)染前狀態(tài)：拍明場(chǎng)細(xì)胞照片留存

5、貼壁細(xì)胞鋪板：6孔板*培養(yǎng)基2ml、培養(yǎng)基中不加雙抗，細(xì)胞密度：60%左右（不同細(xì)胞，按48小時(shí)生長(zhǎng)到90%，往前推算細(xì)胞鋪板密度）

6、轉(zhuǎn)染：將復(fù)合物加入輕搖混勻、培養(yǎng)箱培養(yǎng)

7、換液：轉(zhuǎn)染24小時(shí)后培養(yǎng)基換液

8、轉(zhuǎn)染效率：轉(zhuǎn)染48小時(shí)后拍熒光照片，查看轉(zhuǎn)染效率

9、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)：拍明場(chǎng)細(xì)胞狀態(tài)照片

10、檢測(cè)：總計(jì)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后提取RNA或蛋白檢測(cè)

貼壁細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染步驟：

1、質(zhì)粒提取：使用無內(nèi)毒素提取試劑盒

2、質(zhì)粒溶解：溶于超純水或雙蒸水，一定不能溶于試劑盒Buffer等其他試劑

3、質(zhì)粒熒光：若質(zhì)粒不帶熒光、請(qǐng)使用熒光對(duì)照，方便查看轉(zhuǎn)染效率

4、質(zhì)粒濃度：500-600ng/ul

5、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物制備：取質(zhì)粒8ug和轉(zhuǎn)染試劑8ul混合，吹打混勻室溫靜置15分鐘，無需另外加入任何試劑稀釋

6、細(xì)胞轉(zhuǎn)染前狀態(tài)：拍照片留存

7、貼壁細(xì)胞鋪板：6孔板*培養(yǎng)基2ml、培養(yǎng)基中不加雙抗，細(xì)胞密度：60%左右

8、轉(zhuǎn)染：將復(fù)合物加入輕搖混勻、培養(yǎng)箱培養(yǎng)

9、換液：轉(zhuǎn)染24小時(shí)后培養(yǎng)基換液

10、轉(zhuǎn)染效率：轉(zhuǎn)染48小時(shí)后拍熒光照片，查看轉(zhuǎn)染效率

11、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)：拍明場(chǎng)細(xì)胞狀態(tài)照片

12、檢測(cè)：總計(jì)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后提取RNA或蛋白檢測(cè)