WB蛋白質印跡實驗(Western Blot, WB)樣本采集流程

一般為了提取到足夠的蛋白以及更容易地提取蛋白，需要準備足夠量的樣本，要求樣本量為細胞>10°個，組織>30mg，菌體濕重>10mg,植物>100mg，血清>50uL。蛋白提取的原則:低溫快速，裂解充分。細胞樣本；一般樣本為1×10° ~1×10個細胞

蛋白質印跡(Western Blot, WB)）又稱為免疫印跡(Immunoblot)，是利用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)將樣品中分子量大小不同的蛋白分開，然后通過電轉移的方法將凝膠中的蛋白定量地遷移并幾乎原位復制、固定到固相膜上，再利用抗原、抗體的特異性結合反應，特殊的抗體標記技術以及相應的檢測方法，進而對目的蛋白進行定性、相對定量檢測的技術。WB實驗流程分為樣本采集，蛋白樣品制備，上樣，凝膠電泳，轉膜，封閉，一抗孵育，洗膜，二抗孵育，洗膜，顯色(信號檢測)。一般為了提取到足夠的蛋白以及更容易地提取蛋白，需要準備足夠量的樣本，要求樣本量為細胞>10°個，組織>30mg，菌體濕重>10mg,植物>100mg，血清>50uL。蛋白提取的原則:低溫快速，裂解充分。細胞樣本；一般樣本為1×10° ~1×10個細胞，根據細胞量多少或不同細胞中蛋白含量的多少所加裂解液的量也不相同，一般1×10°個細胞，加裂解緩沖液100~200uL，具體實驗操作時參照以上比例，可進行適當調整。