激子耦合圓二色測試應用
一、概述
激子耦合圓二色發生于大分子兩個手性生色團之間。當兩個生色團位置合適(距離短、角度合適、環境合適等),它們互相電子轉移產生兩個不同的CD帶,如圖1所示。激子耦合圓二色靈敏度和識別度高,它與給定的空間結構相關,可以獲得復雜結構的絕對構型信息。激子耦合圓二色經常用在高分子、手性有機凝膠或其他手性大分子的可見光區,也可用于蛋白的近紫外區,是傳統遠紫外圓二色譜的補充。
圖1:激子耦合能級說明
二、實驗條件
2-氨基嘌呤是經典的熒光標記物,它與胸腺嘧啶或胞嘧啶配對。當兩個2-氨基嘌呤相距較近,它們手性中心相互作用,大分子會扭曲并改變構象,這會產生激子耦合圓二色。本應用說明了在DNA和蛋白相互作用中,由2-氨基嘌呤導致的激子耦合圓二色。測試儀器為MOS-500圓二色光譜儀,波長范圍為300-360 nm,狹縫為2 nm,采樣速度為每點0.5 s。樣品濃度為10 uM,石英比色池光程為1 cm,室溫,沒有氮氣吹掃??瞻撞捎猛瑮l件測試并自動扣減。
圖2:2-氨基嘌呤
三、結果
含有2-氨基嘌呤的DNA-蛋白復合物的圓二色譜如圖3所示。由于DNA自身的圓二色吸收信號一直到310 nm,所以DNA-蛋白復合物的圓二色譜中只看得到正的克頓效應。最大信號在330 nm處為1.2 mdeg,可以看出MOS-500圓二色光譜儀靈敏度很高。通過對比可以看到,沒有加入DNA的圓二色光譜中沒有對應的與圓二色吸收,通過圓二色光譜可以很明顯區分有無激子耦合發生,如圖4所示。
圖3:圓二色譜:DNA+蛋白
圖4:有和沒有DNA情況下的圓二色譜
四、結論
用標準配置的MOS-500圓二色光譜儀就可以很容易的測到激子耦合圓二色譜。通常激子耦合圓二色測試波長大于195nm,而MOS-500圓二色光譜儀在185nm以上不需要氮氣吹掃,可以極大的節省您儀器的運行成本。
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