qPCR軟件報錯了？別慌，這篇文章會給你答案！

在運行qPCR實驗或分析數(shù)據(jù)時，有時候會遇到軟件報錯，小編在這里列舉了Applied Biosystems^TM 品牌儀器軟件的常見報錯，分析了可能的原因和解決辦法，如果您正在使用我們的儀器，希望本文能給您提供一些解決軟件報錯問題的思路。

一、通用報錯(多款機型軟件均可能出現(xiàn))

1. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報錯：java.lang.IIIegalArgumentException: One of the raw spectra is null。點擊OK接受后，擴增曲線是空白(如圖stepone plus軟件)。

問題分析：

可能是單次數(shù)據(jù)異常，導(dǎo)致校正文件丟失。在軟件上點擊Analysis  > override calibration > Use another calibration file 下選擇同儀器相同類型實驗文件做校正 ，重新分析后可以恢復(fù)正常數(shù)據(jù)。出現(xiàn)該報錯的原因可能是雙擊了start run, 或者分析/保存數(shù)據(jù)過程被中斷，例如分析/保存過程中關(guān)閉軟件或拔出U盤。

2. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報錯：Analysis cannot proceed: not enough sample definded（如圖stepone plus軟件，此報錯僅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本軟件）。

問題分析：

plate setup步驟未給樣品孔設(shè)置sample信息，設(shè)置好sample信息后重新分析，數(shù)據(jù)可以恢復(fù)正常。

3. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報錯：Analysis cannot proceed: not enough targets definded（如圖stepone plus軟件，此報錯僅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本軟件）。

問題分析：

plate setup步驟未給樣品孔設(shè)置target信息，設(shè)置好target信息后重新分析，數(shù)據(jù)可以恢復(fù)正常。

4. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報錯：Analysis failed due to: GExSession doesn't exist in context。點擊OK  接受后，擴增曲線是空白（如圖stepone plus軟件）。

問題分析：

擴增循環(huán)階段未采集信號，需要打開信號收集標(biāo)識。

5. 在多重反應(yīng)程序設(shè)置中，給樣品孔添加ROX作為reportor 的探針時，報錯：Dye "ROX" already used in passive reference（如圖Q5軟件）。

問題分析：

儀器默認(rèn)passive reference選擇ROX作為參比熒光，如果實驗中ROX是作為探針的報告基團，則需要將passive reference改成None，之后就可以在target設(shè)置中選擇ROX作為探針了。

6. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報錯：The selected file cannot be opened, cannot open the file because file contents are not recognized（如圖Q5軟件）。

問題分析：

可能的原因包括：

1. 通過導(dǎo)入文件(import plate setup)在實驗中添加了重復(fù)的樣本，使用了相同的sample name，建議編輯樣品名稱時不要使用相同的sample name 命名樣品。

2. 實驗名稱包含不合要求的字符，例如空格，括號等，建議實驗名稱不要使用不符要求的字符。

3. 文件受損，數(shù)據(jù)不完整，建議儀器運行過程中不要操作軟件。

4. 拷貝數(shù)據(jù)的U盤有故障，導(dǎo)致拷貝數(shù)據(jù)不完整，建議更換U盤重新拷貝數(shù)據(jù)。

問題分析：

實驗中選擇的儀器類型與實際使用的儀器不符，需要到Setup界面重新修改為正確的儀器類型。

4. 程序設(shè)置報黃色提醒 "number of data collection points is not valid"

問題分析：

使用7500 v2.4版本軟件產(chǎn)生的數(shù)據(jù)與PTS軟件不兼容，可以將eds數(shù)據(jù)先用7500 v2.3的軟件打開，分析后保存，然后再導(dǎo)入PTS軟件。

問題分析：

plate setup步驟未給樣品孔設(shè)置target或者sample name信息，設(shè)置好target或者sample name信息后重新分析，數(shù)據(jù)可以恢復(fù)正常。

2. 運行PTS實驗報錯：Star run validation: The filter set has not been selected for following target: ROX(x4-m4)。

問題分析：

含melt curve的實驗程序中，軟件默認(rèn)melt curve filter只選擇X1M1，PTS實驗需要從軟件進(jìn)入Method-action-optical filter settings, 在melt curve filter選項中將x4m4選中（Q5也可以嘗試x1m3）。

3. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報錯：Analysis failed due to insufficient data。

2. 打開數(shù)據(jù)點擊analyze分析軟件報錯：Cannot calculate Pure Dye Matrix。

問題分析：

熔解曲線程序設(shè)置錯誤，如下圖中數(shù)據(jù)誤刪掉了60度的步驟，設(shè)成了95度升溫到95.3度。建議使用SYBR Green染料法做實驗時，不要修改熔解曲線步驟，使用儀器默認(rèn)程序即可。