亚洲中文久久精品无码WW16,亚洲国产精品久久久久爰色欲,人人妻人人澡人人爽欧美一区九九,亚洲码欧美码一区二区三区

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>其他文章>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

外周血的簡便提取方法

來源:北京眾仁鑫商貿有限公司   2021年10月28日 14:44  

從外周血提取DNA是一個經常遇到的問題,當然可以用試劑盒提取,不過代價還是有點大,并且不方便,定試劑總要等上幾天,如果血液標本不稀缺資源,不妨用一些簡便方法提取。

方法一

(1) 取抗凝血5ml在沉淀中加入15ml PBS,混勻,離心2000r/min10min。

(2) 將血漿轉至新的試管中,-70℃保存。

(3) 將血細胞轉入另一支試管中(10ml或50ml)加入盡可能多的冷的蒸餾水混勻。

(4) 將其插入冰內5~10min或放入-20℃15min。

(5) 將上述混合液從冰中或-20℃取出放至室溫,離心2000r/min20min。

(6) 棄上清,收集沉淀。

(7) 在沉淀中加入15ml PBS,混勻,離心2000r/min10min。

此步驟重復3次至沉淀為淡紅色或白色。

(8) 將沉淀轉入小管,加少量PBS,每分鐘5000r/min離心5min,去上清。

(9)沉淀-70℃保存。

方法二 簡化鹽析法 

取抗凝血500μl ,加入細胞裂解液Ⅰ1 ml (10 mmol/ L Tris2HCl ;10 mmol/L KCl , 10 mmol/ L MgCl2 , 2 mmol/ L EDTA 和2. 5 % TritonX2100) 混勻,6 000 r/ min 離心5 min ,重復裂解一次,

加細胞裂解液Ⅱ150μl (10 mmol/ L Tris2HCl ; 10 mmol/ L KCl , 10 mmol/ L MgCl2 , 2mmol/ L EDTA 和1 %SDS) 混勻,56 ℃恒溫箱孵育15 min ;

加飽和NaCl 150μl ;混勻,10 000 r/ min 離心5 min ;

小心吸取水相,加2 倍體積的無水乙醇,輕輕混勻,12 000 r/ min 離心5 min ,

棄上清,待干,加50μl 無菌雙蒸水溶解DNA ,備用。

方法三

取EDTA - NaI 抗凝血100μl 加入1. 5 ml 離心管中,加入1000μl 無菌去離子水,輕輕顛倒5~10次,5 000 r/ min 離心3 min ,棄去上清液1000μl ,

加入6 mol/ L Nal100μl ,混旋10 s ,加200μl 氯仿∶異戊醇(24∶1) ,混旋30 s ,

10 000 r/ min 離心3 min ,取上清液150μl 于另一離心管中,

加入90μl 異丙醇,混勻后,10 000 r/ min 5 min ,棄去上清液, 加入1 000μl 75 %無水乙醇洗滌沉淀2 次,再加入1 000μl無水乙醇洗滌沉淀2 次,

沉淀置56 ℃烘干20 min ,加入50μl 無菌去離子水或50μl TE 溶液

個人體會:方法一較復雜,需要用蛋白酶K,方法三不能保證蛋白被*去除,將來影響試驗,所以推薦方法二


免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618