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挑戰極性化合物分離難題,你開掛了嗎?

來源:賽默飛色譜及質譜   2021年10月20日 09:02  
極性化合物一直是液相色譜分析的難點,如何選擇合適的分析色譜柱以及分析方法困擾著大多數的實驗室分析人員。

核苷酸是一類由嘌呤堿或嘧啶堿、核糖或脫氧核糖以及磷酸三種物質組成的化合物,主要參與構成核酸,許多單核苷酸也具有多種重要的生物學功能,如與能量代謝有關的三磷酸腺苷(ATP)、脫氫輔酶等。核苷類藥物,包括其衍生物是一類重要的抗癌藥物,也可作為抗病毒藥物來抑制病毒在人體內的生長繁殖。這些化合物屬于大極性化合物,常規的反相色譜柱通常難以保留。而使用HILIC色譜柱會遇到同分異構體的挑戰從而無法分離。

  

 

賽默飛黑科技

——Hypercarb 色譜柱

 

賽默飛黑科技——Hypercarb 色譜柱,填料為100%的多孔石墨化碳(PGC),球形全多孔顆粒。碳原子排列成六邊形為骨架的多片層結構,沒有任何其它的亞孔或鍵合相。基于這一特點,Hypercarb色譜柱具有不同于硅膠基質固定相的*性質。Hypercarb的表面具有空間選擇性,可以分離幾何異構體及其它結構相近的化合物。Hypercarb對各種流動相溶劑都表現出較好的穩定性,pH1-14之間的流動相皆可用于分離,這使其可在一次運行中對各種極性的化合物進行分析。基于Hypercarb*的疏水和電子云保留機理,它非常適合解決HPLCLC/MS反相和HILIC應用中的問題分離,能夠以超凡能力保留強極性化合物并分離結構性質接近的化合物。

  

 

小編通過兩個案例分享,采用Hypercarb色譜柱,挑戰極性化合物保留分離,如同帶上開掛神器,在堿性流動相條件下,充分保留和分離核苷酸、阿糖胞苷及其含有同分異構體的磷酸化衍生物,對于其他類似結構的極性化合物分離具有極大的參考意義。

- No. -

01

Hypercarb用于5種核苷酸保留分離

儀器:Vanquish Duo UHPLC

色譜柱:Hypercarb100x3mm3umP/N 35003-103030

流動相:A0.3%甲酸水,用氨水調pH=9B: 乙腈

速:0.8 mL/min

進樣量:5 μL

檢測波長:UV 254 nm

  

1  5種核苷酸分離效果

  

嬰幼兒配方全脂羊乳粉中核苷酸分離效果

  

3 5種核苷酸重復性譜圖(n=3

使用Hypercarb色譜柱能有效分離全脂羊乳粉中5種核苷酸與其他雜質,結果可靠,可滿足實驗室檢測需求。圖35種核苷酸的重復性譜圖,可以看到重復性良好,保留時間和峰面積RSD均<1%

- No. -

02

Hypercarb用于阿糖胞苷及其磷酸化衍生物保留分離

儀器:Vanquish Duo UHPLC

色譜柱:Hypercarb100x3mm3umP/N 35003-103030

流動相:A:己胺 (5mM) ,加入DEA (0.4%, v/v), 用冰醋酸調pH=10B: 乙腈/(1/1, v/v)

速:1 mL/min

進樣量:20 μL

檢測波長:UV 272 nm

  

4 7種阿糖胞苷類化合物分離

  

5 7種阿糖胞苷類化合物重復性譜圖(n=6

使用Hypercarb色譜柱保留和分離阿糖胞苷及其磷酸化衍生物,所有化合物均能基線分離,5號峰CTP7號峰Ara-CTP這兩種非對映異構體分離。7種阿糖胞苷類化合物在Hypercarb色譜柱上連續6針進樣,重復性表現優異,保留時間和峰面積RSD2%

本方案開發基于LC-UV,能夠分離頗具挑戰的非對應異構體CTPAra-CTP,對于有低濃度分析要求的實驗室,該方案可根據實際需求應用于LCMSMS

 

今天的分享就到這里啦,大家是不是對Hypercarb保留分離極性化合物更有信心呢?想要獲取更多信息,歡迎掃描下方二維碼獲取應用報告“Hypercarb色譜柱用于核苷酸類及其磷酸化衍生物的分析,下期再會!

 

 

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