Q1：HPLC 方法開發中首要的挑戰是什么？

A1：首要的挑戰有兩個。首先是化合物之間的分離度 問題，色譜分析的前提是分離，只有充分分離才能準 確地定量（使用 MS 作為檢測器時對于非同分異構體 等情況例外）；其次是分析物色譜峰的峰形，當峰形 不佳的時候（可以用拖尾因子、柱效等來衡量），也 會影響分析物的定量和分離。

Q2：有哪些方法可以解決分離度的問題？

A2：1990 年研究人員對這個問題進行了系統的研究， 認為分離度 Rs 主要由三個因素決定，也就是柱效 N， 選擇性 α 和保留因子 k（如下圖）。這些年來的很多 技術革新都是通過提高 N 來提高分離度，比如設計了 核殼硅膠作為色譜柱填料基質或者用 UPLC 儀器搭配 小粒徑（亞 2 μ）顆粒填料。但更根本和有效的途徑是 通過改變選擇性來實現分離，也就是改變難分離的化 合物與固定相和流動相之間的作用力，從下圖中也可 以看到，通過改變選擇性可以有效改善分離度。

Q3：有哪些方法可以改變選擇性？

A3：改變選擇性的方法有很多。最重要的就是從三個 角度出發：分析物本身、流動相以及固定相。對于可 離子化的分析物，根據化合物的 pKa 針對性地改變流 動相 pH 可以有效改變選擇性；另外，由于常用的溶劑 （正相中的乙醇、異丙醇，反相中的甲醇、乙腈）在 氫鍵、極性作用等的差異比較大，因此改變流動相時 常常也會有效改善選擇性；還有非常重要的是可以根 據難分離的化合物之間的差異，針對性地選擇可以識 別這些差異的色譜柱，比如 π-π 作用、氫鍵作用、偶極 - 偶極作用、疏水作用、離子交換作用、形狀選擇性等， 通過選擇合適的色譜柱往往也能達到出奇制勝的效果。

Q4：峰形問題有哪些原因和解決辦法？

A4：解決峰形問題最關鍵的是找對原因。造成峰形問 題的原因有很多，但是大部分是化合物本身的原因， 比如含有與固定相產生強作用的基團（如含 N 的堿性 基團、螯合基團等），或者含有在某些流動相條件下 會互變的基團等。至于解決辦法，就需要對癥下藥， 比如對于前者就需要在流動相中加入添加劑或者選擇 更“惰性”的柱子，對于后者就需要選擇更合適的流 動相條件或者改變分離模式。

Q5：星譜科技提供的色譜柱有哪些優勢？

A5：星譜科技目前主要提供英國 Horizon 色譜公司的 色譜柱，這些色譜柱的主要優勢有三個：首先，它的 多款色譜柱具有*的選擇性，在解決分離度問題方 面很有優勢，比如 C18/AR、C18/PFP 和 amide 18 等 復合型固定相設計，可以在保留 C18 疏水性的基礎上 引入比如 π-π 作用、氫鍵作用、偶極 - 偶極作用等； 其次，幾乎所有的這些鍵合固定相都有核殼硅膠基質 類型填料可供選擇，保證在好的選擇性的同時具有高 柱效，從而獲得更好的分離度；最后，Horizon 色譜 柱選擇的硅膠都是超純、超惰性的硅膠，可以盡量降 低因分析物和硅膠表面的作用而造成的峰形問題。總 結來說，Horizon 色譜柱是解決色譜分析中分離度和 峰形問題的利器。同時，星譜科技的技術人員對色譜柱也有深刻的理解，因此可以根據用戶的具體項目需 要更精準地選擇色譜柱，節約方法開發的時間。