※GRAVIMETER重量法:傳統(tǒng)測(cè)定甘草酸含量的方法是根據(jù)甘草酸遇酸沉淀或酸堿反應(yīng)的理化性質(zhì)采取重量法或滴定法測(cè)定。重量法是將甘草酸提取液進(jìn)行過濾,加入濃鹽酸或硫酸,使甘草酸沉淀析出,過濾烘干后精密稱量,即得到樣品中含有的甘草酸質(zhì)量。重量法測(cè)甘草酸:取本品約6g,精密稱定,加水50ml溶解后,移至100mI量瓶中,用乙醇稀釋至刻度,混勻,靜置12小時(shí),精密吸取上清液25ml置燒杯中,加氨試液3滴,置水浴上蒸發(fā)至稠膏狀,加水30ml使溶解,緩緩加入鹽酸溶液(3→10)5mI,在冰水中靜置約30分鐘,濾過,沉淀用冰水洗滌4次,每次5ml,棄去洗液及濾液,沉淀在濾紙上放置約2~3小時(shí),使水分自然揮散,再用預(yù)先加熱至60~70℃的乙醇10ml使沉淀溶解,濾過,濾器用熱乙醇洗滌至洗液無色,合并乙醇液,置已干燥至恒重的燒杯中,在水浴上蒸干,并在105℃干燥3小時(shí),精密稱定,計(jì)算供試品中甘草酸的含量,即得。本品含甘草酸不得少于20.0%
※HPLC液相檢測(cè)方法:(1)色譜條件。色譜柱為Diamonsil(鉆石)C18(250mm×4.6mm),粒度5μm,流動(dòng)相:甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸(61∶39∶1),柱溫:25℃,流速:1ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng):250nm;(2)對(duì)照品溶液的制備。精密稱取甘草酸單銨鹽對(duì)照品 適量,加流動(dòng)相制成每1ml含0.2mg的溶液(折合甘草酸為 0.1959mg),即得;(3)供試品溶液的制備。取甘草提取物樣品0.1g,精密 稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入流動(dòng)相25ml,稱定重量,超聲處理20min,取出,放冷,再稱定重量,用流動(dòng)相補(bǔ)足減失重量,搖勻,濾過,即得;(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密吸取甘草酸單銨鹽對(duì)照品液(0.2172mg/ml)2、6、10、14、18μl分別注入液相色譜儀,記錄 色譜,以峰面積(A)對(duì)質(zhì)量數(shù)(C)進(jìn)行線性回歸計(jì)算;(5)精密度試驗(yàn)。分別精密吸取供試品溶液10μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,按正文所述色譜條件測(cè)定,記錄色譜,計(jì)算;(6)重現(xiàn)性試驗(yàn)。取樣品按供試品溶液制備方法制備5 份供試品溶液,分別精密吸取供試品溶液10μl進(jìn)樣,記錄色譜,計(jì)算;(7)加樣回收率試驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取已知含量的樣品0.05g;(8)空白試驗(yàn)。按處方比例及生產(chǎn)制備方法,按供試品溶液制備項(xiàng)下制備陰性溶液,進(jìn)樣10μl,記錄色譜圖;(9)測(cè)定法。分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)得
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