慢病毒包裝簡要程序:
以六孔板中的1孔為例,每個樣品需要1×10∧6個293FT細胞。
1、取1.5ml滅菌EP管,加入1.5μg包裝混合質粒和0.5μg表達質粒以及250μl的無血清Opti MEM。輕柔混勻,室溫孵育5min。
2、取1.5ml滅菌EP管,取9μl 脂質體2000l溶于250μl無血清Opti-MEM I培養基中。輕柔混勻,室溫孵育5min。
3、將DNA溶液和脂質體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min
4、用胰酶消化并記數293FT細胞。用含血清的DMEM培養基重懸細胞。
5、在六孔板中每孔,加入1ml含血清的生長培養基,再加入DNA-脂質體復合物。
6、將1ml重懸的293FT細胞(1×10∧6個細胞/ml)加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育過夜。
7、移除含有DNA-脂質體復合物的培養基移除,代之以DMEM(含丙酮酸鈉和非必須氨基酸)。
7、轉染后48-72h收獲含病毒的上清。3000 rpm 離心20min,去除沉淀。
8、病毒上清-80°C貯存。
包裝出來的慢病毒對NIH/3T3細胞達90%以上感染效率
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。