全自動寡核苷酸合成的脫保護步驟對合成時間和產品質量非常重要。為了提高合成速度、純度和產率,我們經常使用如下幾種快速脫保護試劑。
1. 用dC(ac)代替dC(bz) —— Beckman 認證方法
Acetyl-protected phosphoramidtes的特征:
- 超速脫保護(65℃時10 min)
- 寡核苷酸合成中是關鍵成分
- 工業標準
- 使用AMA方法時不變化
- 純度與操作非常相關
- 在認證的ISO 9001質量系統下操作
2. TAC試劑
在溫和條件下,用含TAC保護基代替標準保護基可使脫保護反應加速(在溫和條件下),適用于含有base-labile單體的寡核苷酸。
TAC的特征:
- TAC基團的脫保護速度很快,在有濃氨條件下,55℃ 15min或在室溫中2 h。
- 與AMA脫保護試劑兼容(AMA是一個混合物,含有大于25%的氨溶液和40%的jia胺)
- 在乙腈中易溶。不需要加入混合溶劑,如二甲基甲酰胺或二氯甲烷。
- 適用于含有活潑基的低聚體合成,如燃料和修飾物。
- DNA合成中不變化是必要的條件,除快速脫保護試劑Cap A代替Cap A。
- 應用dA(tac)可以提高寡核苷酸的質量.
3. dG(dmf)方法
改變二甲基jia胺(dmf)dG的保護基可以加速合成高純度、高產率的寡核苷酸。因此也提高了高通量的產量。
dG的特征
- dG(dmf)脫保護的速度比傳統dG(ib)快,在濃氨中脫保護的時間是55℃ 2 h,65℃ 1 h。
- dG (dmf)-單體適用于G多的序列;與傳統的dG(ib)比較,未脫保護率被極大地降低了。
- dG (dmf)-amidite在溶液中與dA(bz)、dC(bz)、dT一樣穩定。
- dG(dmf)amidite可以直接替代dG (ib)-amidite
- 在DNA合成中沒有改變是必須的條件,除有低濃度的iocline oxidizer,如0.02 Miocline, 存在。
4. 替代dC保護基
改變TAC dC的保護基可以加速合成高純度、高產率的寡核苷酸。用dC (tac)代替dC (bz)可以加快AMA脫保護的速度,提供高通量寡核苷酸的合成。
dC的特征
- 用AMA脫保護可以加速,*脫保護需要10 min,在65℃條件下。
- C-單體的副反應通過轉氨作用被消除。
- 對一些修飾過的核苷酸都可用。
- dC (tac)-amidite可以直接替代dC (bz)-amidite。
- 用乙腈溶解amidite, DNA合成不改變。在標準醋酐的capping試劑中可以用。
DNA快速脫保護基反應器是為有效制備生物樣品而設計的,用于PCR引物、探針和組分生產,DNA測序、DNA和RNA合成、隨機啟動、載體設計、DNA指紋和人工基因合成。是DNA/RNA/寡核苷酸脫保護基快捷穩定的解決方案。反應可直接在96位樣品架上進行,如“深井”板。6-10個樣品架可用于10升壓力反應器。因此,操作工作量大大縮短。樣品被填充不同的板,例如帶有過濾底座、特殊蓋等,通過設計的電動升降系統,在反應中和反應后自動移出壓力容器進行干燥。在開啟和關閉過程中,會抽走腐蝕性反應氣體,確保實驗室人員的*安全。與樣品的反應發生在氣相的壓力和微波效應下。高氣相濃度會在幾分鐘內引起*均勻的反應。在系統中,所有操作參數均一直根據程序條件進行控制,并以圖形方式記錄和存儲以進行質量控制。在整個過程中,液體試劑以及氣相中的壓力和溫度是被控制的。這確保了樣品的完整、可重復和均勻反應,以便隨后分離出選擇性DNA序列。*的10升反應器容量為*的樣品吞吐量提供了新的可能性。
DNA快速脫保護基反應器應用:
食品工業
研究機構
大學
分子生物學
遺傳學
合成生物學
醫學
寡核苷酸脫保護基微波高壓反應器特點:
反應器容量:10升容量
樣品數量:6至10個,每個樣品有96位。
溫度范圍:*200°C
功率輸出:1200瓦
符合CE標志
保修12個月
電源:220 V至240 V/50/60 Hz
*功耗:2500瓦
顯示屏:彩色觸摸屏
尺寸:W x D x H 52 x 73 x 123厘米(無終端)
重量:180公斤
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