人醛固酮(ALD)ELISA試劑盒

 (用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

一、原理：

   本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 ALD 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 ALD與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人ALD，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，ALD濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中ALD濃度。

二、試劑盒組成（2-8℃）

三、準(zhǔn)備試劑與收集血樣：

1. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
2. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。血清、血漿建議作1：5稀釋（取20ul，加標(biāo)本稀釋液80ul,稀釋5倍）。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成4000pmol/L的溶液。取8個(gè)1.5ml離心管，管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在管中加入4000pmol/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

四、檢測(cè)程序：

1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃40分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔加入蒸餾水和抗體工作液各50ul(空白除外)。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃10分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。  

?五、結(jié)果計(jì)算與判斷：

1. 所有OD值建議減除空白值后再行計(jì)算。如空白OD低于0.1，也可以直接計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品400、200、100、50、25、12.5、6.25、0 pmol/L為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，使用軟件作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

根據(jù)樣品OD值計(jì)算出相應(yīng)ALD含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。軟件可以向本公司郵件索取。

六、試劑盒性能:

1.靈敏度：小的ALD 檢測(cè)濃度小于3pmol/L。

2.特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人ALD。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10％。

七、注意事項(xiàng)：

1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.   洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

3.   檢測(cè)時(shí)所有試劑都要恢復(fù)到室溫。板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

4.   試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過(guò)深會(huì)出現(xiàn)絮狀物，屬正常現(xiàn)象，不影響結(jié)果判讀。

5.   說(shuō)明書(shū)中試劑盒組成為96T的量，48T的量應(yīng)減半！

6.   本試劑盒宜置4^oC冰箱保存。僅用于科研，不能用于臨床診斷！