左旋肉堿(L-Carnitine, β-羥基γ-三jia銨丁酸)又稱肉毒堿或維生素 BT,其化學(xué)式為C7H15O3N,分子量為162.2,是一種類氨基酸。L-肉堿作為 載體將長鏈脂肪酸從腺粒體膜外輸送到膜內(nèi),促進(jìn)脂肪酸的β-氧化,從降低 血清膽固醇及甘油三脂的含量,提高機(jī)體耐受力及減少代謝毒性作用[i-iv] 。對 嬰幼兒來說,L-肉堿在維持嬰幼兒生命及許多促進(jìn)發(fā)育的生理過程,如生酮 作用、蛋白質(zhì)代謝等方面均有一定的功能[v,vi] 。我國及許多其它國家已規(guī)定在 嬰幼兒食品配方中添加適量的L-肉堿,以滿足其生理需要,更好地促進(jìn)嬰幼 兒健康成長[vii-x] 。
左旋肉堿極性較強(qiáng),缺少發(fā)色基團(tuán),定量分析困難。國內(nèi)外對左旋肉堿 的測定主要有酶法[xi,xii] 、電泳[xiii,xiv] 、流動相注射串聯(lián)質(zhì)譜法[xv] ,液相色譜 法[xvi-xix] 等。酶法專屬性強(qiáng),但前處理繁瑣,液相色譜法中低波長檢測則 干擾較多,衍生法靈敏度高,但前處理復(fù)雜,所用衍生劑毒性強(qiáng)。其它方法 有的靈敏度較低。有的設(shè)備較貴等原因較少使用。
離子色譜法可測定在水溶液中能電離的物質(zhì)。在酸性溶液中,左旋肉堿 表現(xiàn)為陽離子特性,帶正電荷,可用陽離子交換色譜柱分離。但左旋肉堿的 兩性特征使其在抑制后呈電中性,無法采用抑制型電導(dǎo)檢測。同時,奶粉中 左旋肉堿添加量較低,需要更低檢出限的測定方法。為此,我們通過實驗, 摸索出左旋肉堿的在線固相萃取非抑制型離子色譜測定的新方法。該方法前 處理簡便、檢測快速,用于奶粉樣品中左旋肉堿的檢測,結(jié)果令人滿意。
測試條件 儀器:ICS系列離子色譜系統(tǒng)帶雙六通閥及雙泵。 分析柱: IonPac CS17+IonPac CG17,4mm 濃縮柱: IonPac TCC-UPL1 MSA:0-20min,3mM;流速:1mL/min 柱溫:30℃ 檢測方式:抑制型電導(dǎo)檢測 進(jìn)樣量:500µL
樣品前處理 稱取奶粉樣品約1 g至50 mL比色皿中,加入超純水 14 mL,適當(dāng)搖晃,使奶粉充分溶解后加入21 mL乙腈 沉淀蛋白,靜置10 min,取上層清液,10000 r/min離心 10min后,稀釋5倍,將稀釋液依次通過0.22µm尼龍濾膜 和OnGuard II RP柱、Na柱,棄去6mL初始流出液后采集 2mL樣品用于離子色譜測定。 OnGuard II RP柱(規(guī)格2.5cc),預(yù)先使用10mL甲 醇和15mL水活化。 OnGuard II Na柱,用10mL水活化。
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