微生物、細(xì)菌及衛(wèi)生學(xué)潔凈度現(xiàn)場快速檢測的新寵食品、藥監(jiān)、醫(yī)院感控、環(huán)境、水質(zhì)、化妝品及衛(wèi)生監(jiān)督、檢測

ATP細(xì)菌檢測原理及手段

/手持ATP熒光檢測儀

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ATP熒光法用于細(xì)菌檢測原理及儀器試劑ATP(Adenosine Triphosphate)，中文名為腺嘌呤核苷三磷酸，又叫三磷酸腺苷。它普遍存在于細(xì)菌等微生物細(xì)胞內(nèi)，ATP是微生物新陳代謝的能量物質(zhì)。ATP生物發(fā)光法是利用ATP試劑中若干組分如熒光素-熒光素酶等與被測樣本反應(yīng)產(chǎn)生光子，再利用專門研制的熒光檢測儀來捕捉和檢測發(fā)光值，由于被測樣本所含細(xì)菌等微生物的數(shù)量與所含的ATP值、以及ATP值與發(fā)光值之間存在一定的函數(shù)關(guān)系，因此通過檢測發(fā)光值即能得到被測標(biāo)本所含細(xì)菌等微生物含量。利用ATP檢測儀配合ATP試劑便可實現(xiàn)熒光法檢測細(xì)菌及潔凈度指標(biāo)。

國內(nèi)外ATP儀器及試劑

/手持ATP熒光檢測儀

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手持ATP儀比臺式ATP儀更適合現(xiàn)場快速檢測       為了滿足現(xiàn)場快速檢測的需求，ATP熒光檢測儀宜選擇手持ATP熒光檢測儀（也叫手持式ATP熒光檢測儀），而實現(xiàn)流動狀態(tài)即時檢測，因為盡管大型的臺式ATP熒光檢測儀在靈敏度方面可能優(yōu)于手持式ATP儀,但它只能在實驗室狀態(tài)下使用，不利于餐飲服務(wù)、醫(yī)療感控等流動場所現(xiàn)場檢測。國外ATP檢測技術(shù)從上世紀(jì)90年開始研究，發(fā)展至今有了長足的進(jìn)步和發(fā)展       ATP檢測技術(shù)實驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠，值得信賴。美國多個專業(yè)機(jī)構(gòu)研究了1000個以上的樣品，這種只需十幾秒就能完成檢測的快速檢測法所得實驗結(jié)果90%以上與24-48小時標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌培養(yǎng)法/平皿法所得結(jié)果一致。測試飲用水時，比標(biāo)準(zhǔn)法靈敏度大100倍以上，樣品量只要傳統(tǒng)方法的1/100。本產(chǎn)品測定結(jié)果與傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法所得結(jié)果相比，相關(guān)性高達(dá)92-98%。加拿大食品監(jiān)查協(xié)會經(jīng)過比對實驗后發(fā)現(xiàn)，本產(chǎn)品測定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法的相關(guān)性是98%。美國FDA推薦使用ATP檢測系統(tǒng)和試劑盒用于牛奶細(xì)菌數(shù)的快速檢測。首屆中美食品安全及其全程控制研討會暨微生物快速自動檢測技術(shù)培訓(xùn)班也將ATP快速檢測技術(shù)作為培訓(xùn)內(nèi)容之一。在巴西召開的第11屆世界滅菌大會暨第7屆滅菌與醫(yī)院感染控制論壇，與會專家做了ATP方法用于清洗效評價的研究報告，結(jié)論是該方法效果和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法基本一致，所以在許多國家“醫(yī)用清潔評價”相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中，ATP方法被列入作為評價手段之一。通過應(yīng)用和評估，美國CDC制定的《醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒滅菌指南2008》也將ATP方法作為評價內(nèi)鏡清洗或內(nèi)鏡處理效果的新方法。

近幾年來國內(nèi)由于應(yīng)用需求牽引，優(yōu)勢單位在研制出了具有自主知識產(chǎn)權(quán)的手持ATP 熒光檢測儀和ATP試劑并在多個領(lǐng)域的到成功應(yīng)用。中國CDC有研究證實，ATP檢測結(jié)果與不同濃度的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和血液成直線相關(guān)。通過ATP方法對細(xì)菌檢測和表面潔凈度檢測的應(yīng)用和技術(shù)評估，ATP熒光檢測儀已成為中國衛(wèi)生監(jiān)督和中國食品藥品監(jiān)督*部門的衛(wèi)生監(jiān)督和食品安全相關(guān)的檢測設(shè)備，被國家用于食品加工、儲存運輸、貿(mào)易、餐飲服務(wù)以及醫(yī)療系統(tǒng)物體表面及操作人員手等表面潔凈度快速測定，并且以發(fā)放政府文件的方式要求購買和配備ATP熒光檢測儀和配套試劑，作為衛(wèi)生監(jiān)督和食品安全現(xiàn)場快速檢測能力建設(shè)的重要舉措。

國內(nèi)在2005年前后開始進(jìn)行手持式ATP熒光檢測儀研制，并且研發(fā)出*臺手持式ATP熒光檢測儀和2010年研制出現(xiàn)場快遞檢測ATP試劑一體化拭子，并且取得了國內(nèi)*手持式ATP熒光檢測系統(tǒng)相應(yīng)的發(fā)明，隨著需求的擴(kuò)大和其產(chǎn)品儀器試劑逐步走向成熟，國產(chǎn)產(chǎn)品銷售強勁增長逐步替代了進(jìn)口儀器的份額。

◆從2005年即開始手持式ATP熒光檢測儀及配套試劑研制◆2006年承擔(dān)西安市科技計劃項目“基于ATP熒光和焦磷酸測序的有害病源快速檢測系統(tǒng)及儀器”◆2007年手持式ATP熒光檢測系統(tǒng)申請，2009年獲得國家發(fā)明授權(quán)證書◆2007年手持式ATP熒光檢測儀獲得國家科技型中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新基金支持，2010年并通過驗收

手持式ATP熒光檢測儀獲得國家科技型中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新基金支持

◆2007年獲得了質(zhì)量檢驗機(jī)構(gòu)的檢驗報告，性能達(dá)到和超過相關(guān)部門規(guī)定指標(biāo)◆2008年獲國家重點新產(chǎn)品證書◆2009年開始出口創(chuàng)匯◆2010年獲得陜西省二等獎和西安市科技二等獎各一項◆2010年獲全國發(fā)展展覽會銀獎◆2012年現(xiàn)場快速一體化檢測ATP試劑獲得國家授權(quán)

◆時至2010年BioLum型手持式ATP熒光檢測儀和現(xiàn)場快速檢測ATP試劑一體化拭子進(jìn)入批量生產(chǎn)，性能達(dá)到和超過國家標(biāo)準(zhǔn)要求，滿足食品藥品監(jiān)督部門、衛(wèi)生監(jiān)督部門、食品加工行業(yè)、餐飲服務(wù)行業(yè)、航空配餐、大型企業(yè)食堂、學(xué)校食堂、大型活動保障部門等食品安全涉及領(lǐng)域細(xì)菌和環(huán)境物體表面檢測、手衛(wèi)生檢測、餐飲具表面潔凈度檢測；化妝品制造業(yè)污染控制、醫(yī)院感染控制、空氣細(xì)菌污染檢測、環(huán)境監(jiān)管部門等污染監(jiān)管領(lǐng)域細(xì)菌檢測和表面潔凈度檢測。◆2011年、2012年滿足上述國家衛(wèi)生監(jiān)督和食品藥品監(jiān)督部門等國家需求，替代進(jìn)口產(chǎn)品。◆2012年受國家863科技計劃和陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計劃滾動支持，進(jìn)一步研究用于醫(yī)用水質(zhì)檢測、醫(yī)療器械清洗后效果評價等更高性能ATP熒光檢測儀

國家法規(guī)要求使用ATP儀

/手持ATP熒光檢測儀

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? GB 4789.3 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗? GB 5749 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)? WS/T 313醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范? 藥品GMP認(rèn)證檢查評定標(biāo)準(zhǔn)國食藥監(jiān)安[2007]648號? 中國藥典2010版藥品微生物檢查法? 餐飲服務(wù)食品安全現(xiàn)場快速檢測設(shè)備? 燒傷病房/手術(shù)病房/普通病房物體表面衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)? 醫(yī)院感染監(jiān)測規(guī)范? 縣級衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)現(xiàn)場快速檢測設(shè)備裝備標(biāo)準(zhǔn)（須配備ATP熒光檢測儀用于餐飲具、食品加工工具、用具等物品表潔凈度快速測定）? 餐飲服務(wù)食品安全現(xiàn)場快速檢測設(shè)備配備基本標(biāo)準(zhǔn)（須配備ATP熒光檢測儀用于餐飲具、食品加工工具、用具等物品表潔凈度快速測定）

ATP方法使用和評價

/手持ATP熒光檢測儀

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ATP熒光檢測法能在十幾秒內(nèi)實現(xiàn)檢測，它大大提升了傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法24-48小時的工作效率，ATP方法的實現(xiàn)包括儀器、試劑和如何使用三大要素。

當(dāng)儀器和試劑配合使用，整體靈敏度達(dá)到10-15-10-18摩爾 ATP范圍時，可以用于 食品表明微生物檢測、手衛(wèi)生檢測、餐飲器具潔凈度檢測、重點科室和重要活動場所（如奧運會、世博會、人大政協(xié)會議等）物表檢測和衛(wèi)生安保、食品加工器具、工作臺等關(guān)鍵控制點消毒結(jié)果檢測、醫(yī)療環(huán)境工作平臺（器械表面、內(nèi)窺鏡、空調(diào)進(jìn)出氣口）衛(wèi)生學(xué)即時評估，其實時監(jiān)測數(shù)據(jù)能有效配合HACCP或GMP體系管理的要求；當(dāng)儀器和試劑配合使用，整體靈敏度達(dá)到10-17-10-19摩爾ATP范圍時，可用于更高要求的檢測如復(fù)用醫(yī)療器械清洗效果后評估和二次清潔處理評價、醫(yī)療用水檢測等。當(dāng)然目前國外ATP設(shè)備和試劑的研發(fā)已經(jīng)向更高目標(biāo)——可檢測到1O-18至10-21摩爾水平的ATP努力，檢測試劑也可達(dá)到5個細(xì)菌細(xì)胞的水平。

的ATP試劑盒，必須是可去除游離ATP和體細(xì)胞ATP，只針對細(xì)菌細(xì)胞ATP檢測，所謂去除干擾物，這是基本要求。其次熒光素酶、蟲螢光素、裂解液、取樣拭子等組分設(shè)計成一體化，整體便于現(xiàn)場攜帶方便檢測使用，試想如果不是ATP試劑一體化拭子形式，而是各組分瓶瓶罐罐帶到現(xiàn)場臨時配制試劑如何能做到準(zhǔn)確性和現(xiàn)場快速檢測呢？

是影響準(zhǔn)確性和一致性的關(guān)鍵之一，可按照<<醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 附錄A（規(guī)范性附錄）采樣及檢查方法>>等規(guī)范要求再參照手持式ATP儀說明書采樣、檢測、計算得出結(jié)果并記錄報告。采樣：（面積類）將ATP拭子采樣棒一支在物體表面或雙手指曲面從指跟到指端來回涂擦個兩次（一只手涂擦面積約30cm2），并隨之轉(zhuǎn)動采樣拭子。（體積類）將ATP拭子采樣棒一支在待測液體充分浸濕。檢測：將拭子放入手持ATP儀，獲得被測樣本與細(xì)菌污染程度相對應(yīng)的ATP生物熒光值，得出菌落數(shù)指標(biāo)（詳見下文操作步驟及定標(biāo)評價）。另外天隆牌ATP儀自帶的軟件能自動將ATP熒光值儲存、處理和傳輸。如何使用  檢測操作步驟

手持式ATP 熒光檢測儀

結(jié)果判讀

/手持ATP熒光檢測儀

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以上取樣、檢測全過程在１分鐘之內(nèi)快速完成，比起24-48小時的傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)優(yōu)勢巨大。細(xì)菌數(shù)量與細(xì)菌內(nèi)所含ATP量有明確的相關(guān)性，通過檢測ATP含量可間接得出細(xì)菌數(shù)量，即ATP熒光檢測儀檢測結(jié)果顯示的發(fā)光值——相對照度單位RLU讀數(shù)與常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)法結(jié)果菌落數(shù)CFU具有很高的相關(guān)性，兩者沒有統(tǒng)計上的顯著差異，因此這也是ATP熒光法細(xì)菌檢測的理論基礎(chǔ)。舉例來說，某食品加工廠上班前使用ATP檢測儀對生產(chǎn)工人進(jìn)行手衛(wèi)生檢測，檢測值<80RLU合格參考值時，判定洗手消毒合格；檢測值≥80RLU合格參考值時判定洗手消毒不合格，需要重新洗手直至滿足規(guī)定的合格參考值才能上崗工作，合格參考值（如８０）的確定需科學(xué)合理，不同應(yīng)用場合不建議規(guī)定統(tǒng)一的參考值，須根據(jù)不同品牌ATP熒光儀、ATP試劑、被測對象潔凈度不同要求等具體情況和對一定量的檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析來確定。