親水性乙烯基樹(shù)脂基質(zhì)蛋白分離用色譜柱,除了可選用鍵合了離子交換基團(tuán)的離子交換柱外,還可選用疏水反應(yīng)、親和等其他多種類型的柱子。
這些類型的色譜柱,其充填介質(zhì)化學(xué)穩(wěn)定性好,不易發(fā)生由于官能基脫落而導(dǎo)致樣品組分洗脫位置變化的現(xiàn)象。盡管如此,由于柱子的反復(fù)使用,在長(zhǎng)時(shí)間使用后,樣品組分的洗脫情況還是會(huì)發(fā)生改變的。其原因與樣品中極微量的附吸物在柱中的蓄積有關(guān)。特別由于生物樣品組分復(fù)雜,這種吸附現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。(非特異性吸附)當(dāng)觀察到這樣的現(xiàn)象后,應(yīng)使用合適的溶劑將蓄積的吸附物質(zhì)去除,以恢復(fù)柱子的性能。
1、0.1-0.2mol/L NaOH水溶液(ABA-5PW柱不適用)
測(cè)定狀態(tài)下,用0.1-0.2mol/L的NaOH水溶液通過(guò)樣品進(jìn)樣閥清洗數(shù)次(3-5回)。
2、20-40% 醋酸水溶液
與上述NaOH水溶液的清洗方法相同。
3、在淋洗液中添加水溶性有機(jī)溶劑(疏水性吸附物質(zhì)的去除)
在淋洗液中添加甲醇、乙腈等水溶性有機(jī)溶劑(濃度《20%)進(jìn)行過(guò)柱清洗。(注意鹽的析出)
4、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性劑(難溶性蛋白的去除)
在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面活性劑(Triton、Tween、Brij等)后進(jìn)行過(guò)柱清洗。但需注意尿素及界面活性劑的柱中殘留。
通常情況下,使用方法1和2便可將吸附物質(zhì)去除。如果方法1和2不能恢復(fù)柱效,則可使用方法3和4。注意,在附吸成分其吸附力較強(qiáng)時(shí),即使進(jìn)行過(guò)清洗,柱性能也有可能得不到恢復(fù)。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。