原理和方法

鈣離子濃度檢測通常利用鈣離子敏感的熒光探針，這些探針能夠與細胞內的鈣離子結合，導致其熒光特性發生改變。通過流式細胞術，可以測量這些熒光變化，從而定量分析細胞內的鈣離子濃度。常用的鈣離子熒光探針包括Fluo-3 AM、Fura-2 AM和Indo-1 AM等，它們在進入細胞后被細胞內的酯酶水解，釋放出熒光探針，后者與鈣離子結合后發出熒光，其強度與鈣離子濃度成正比。

實驗操作步驟

  1.探針裝載：將細胞與鈣離子熒光探針（如Fluo-3 AM）共孵育，使探針進入細胞內。

  2.孵育條件：孵育通常在37°C的條件下進行，有時需要避光以保護探針不受光照影響。

  3.洗滌：孵育后，使用無鈣的緩沖液洗滌細胞，以去除未進入細胞內的探針。

  4.流式細胞儀分析：使用流式細胞儀檢測細胞的熒光信號，通常使用488nm的激發光和適當的濾光片來收集熒光信號。

  5.數據分析：通過分析熒光強度，可以計算細胞內的鈣離子濃度。

實驗中的關鍵點和注意事項

  1.確保使用的實驗器具和試劑不含有鈣離子，以避免影響實驗結果。

  1.控制細胞濃度，以避免阻塞流式細胞儀的流動系統。

  1.在實驗過程中應避免直接光照射探針，以防熒光淬滅。

  1.使用適當的陰性和陽性對照來校準設備和驗證實驗條件。

時效性信息

最新的信息顯示，流式細胞術在鈣離子濃度檢測方面仍然是一個重要的工具，它能夠提供關于細胞內鈣動態變化的實時信息。例如，有研究使用流式細胞儀動態監測大鼠胰腺腺泡細胞內鈣離子濃度的變化，以及Jurkat細胞在不同刺激下的鈣離子濃度動態變化。這些研究強調了流式細胞術在生物學和醫學研究中的應用價值。在進行實驗時，應特別關注這些最新的實驗方法和技術進展。