1 物理方法
又稱機械法,分為3種:(1)研磨法，即通過簡單研磨后過濾去除雜質。本法一般針對脆性較大的組織,雖簡單易行,但對細胞損傷較大,且經過濾獲得的細胞純度不高;(2)振蕩法,即通過振蕩后過濾獲得細胞懸液,一般針對細胞間聯接不是非常緊密的組織;(3)直接分離法：本法所得細胞產量較高,形態完整,分散度好，雜質少,但活性與功能較差,且隨著培養時間的延長,活性及功能逐漸下降,不適于一些持續時間較長的實驗研究。
2 化學方法
又稱鰲合法,即利用一些特殊的化學試劑破壞細胞間的聯接。Ca2+、Mg2+等在細胞間橋粒聯接中起重要作用，鰲合劑(EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等)結合了這些離子后，可使橋粒聯接斷開,有利于細胞分離。本法單獨使用效果較差,常與酶消化法結合使用。
3 生物方法
使用普遍的是酶消化法,即利用特定的酶溶液溶解、破壞細胞間蛋白聯接,是目前分離獲取游離組織細胞常用的方法。根據不同細胞不同的蛋白聯接應選用不同的酶種類。膠原蛋白在高等動物機體中含量豐富,是動物和人體皮膚、血管.骨胳等組織的主要基質,故常用的是膠原酶法。膠原蛋白有很多種類型,其對應的酶也各不相同。位于基底膜的第IV型膠原蛋白是維持細胞養分和其他正常代謝的重要關鍵,故破壞此蛋白一般即可達到分離的目的。