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一、實驗原理
細胞劃痕(wound healing)法是簡捷測定細胞遷移運動和修復能力的方法,類似體外傷口愈合模型,在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央區域劃線,去除中央部分的細胞,然后繼續培養細胞至實驗設定的時間,取出細胞培養板,觀察周邊細胞的生長遷移能力,實驗通常需設定正常對照組和實驗組,實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別,通過不同分組之間的細胞對于劃痕區修復能力的不同,可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。
二、實驗步驟
1、 所有要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min. .
2、先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,大約每隔0.5-1cm一道,橫穿過孔,每孔至少穿過5 條線。
3、在空中加入約5X105個細胞(具體數量因細胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿),37C培養箱培 養。
4、第二天用10μ1槍頭比著直尺,與標記線垂直的方向劃兩條平行線,槍頭要垂直,不能傾斜。
5、用PBS洗細胞3次,去除劃下的細胞,加入無血清培養基。
6、放入37°C 5% CO2培養箱,按0、6、12、24h倒置顯微鏡觀察,拍照。
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