我司人磷脂爬行酶1試劑盒胞近3000種,來源于美國ATCC,細胞都是經過嚴格質量控制,在中國大陸努力搭建正牌細胞與國內廣大科研人員之間的溝通橋梁,還有更多相關實驗產品,標準品,細胞株和實驗技術服務等等前期后續服務。
人磷脂爬行酶1試劑盒
迷人的實驗,放心的選擇
我司人磷脂爬行酶1試劑盒胞近3000種,來源于美國ATCC,細胞都是經過嚴格質量控制,在中國大陸努力搭建正牌細胞與國內廣大科研人員之間的溝通橋梁,還有更多相關實驗產品,標準品,細胞株和實驗技術服務等等前期后續服務。
Q1. 液體培養基的保存是冷藏好?還是冷凍好?
要冷藏!!因為液體培養基經冷凍后再經溶化時,其溶液的pH值會發生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。
Q3.細胞計數及存活測試
1、原理:
(1)計算細胞數目可用血球計數盤或是Coultercounter粒子計數器自動計數。
(2)血球計數盤一般有二個chambers,每個chamber中細刻9個1mm2大正方形,其中4個角落之正方形再細刻16個小格,深度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片后,每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時,計數每個大正方形內之細胞數目,乘以稀釋倍數,再乘以104,即為每ml中之細胞數目。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion,利用染料會滲入死細胞中而呈色,而活細胞因細胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍色之trypan blue染料,如果細胞不易吸收trypan blue,則用紅色之Erythrosin bluish。計算細胞活率:活細胞數/(活細胞數+死細胞數)×100%。計數應在臺盼蘭染色后數分鐘內完成,隨時間延長,部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質有很強的親和力,用不含血清的稀釋液,可以使染色計數更為準確。
Q4.細胞特性
在細胞培養之前,我們要了解一下你所要養細胞的基本特性,這點可以從細胞的產品說明書或者從ATCC細胞庫查詢。除此之外我們還要知道每管細胞的數量,建議分裂或傳代的比例,和已知細胞的傳代代次等信息。
Q5.準備培養基
復蘇細胞時需要準備合適的培養基,血清和細胞生長所需的添加劑。大部分培養細胞所用的培養體系,可以在訂購細胞系時獲得。
雖然大多數細胞系可以在不止一種培養基中生長,但是當培養基改變時,細胞的性質也會變化。因此,使用細胞庫推薦的培養基來培養細胞會獲得的效果。
Q6.開啟凍存管
1.準備一個培養瓶,加入適宜細胞培養的培養基,液體體積按照說明書的推薦配置,并平衡培養基的溫度和pH(CO2)。
2.在37℃水浴中或細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快,約2分鐘或直到冰晶融化即可。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行。
4.擰開凍存管的管帽并將內容物轉移到一個含有9 ml推薦培養基的無菌離心管中。通過溫和離心(125×g 10 min)除去冷凍保護劑(DMSO)。棄去上清,并用1或2 ml*培養基重懸細胞。將這些細胞懸液轉移到含有*培養基的培養瓶中并輕輕搖動以*混勻。
5.培養24小時后檢查細胞狀態并在需要時進行傳代。
Q7. 培養用液pH對細胞生長的影響
由于,大多數細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。
但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環境中更利于細胞生長。因此,我們在配制培養用液時,可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。