禽腦脊髓炎抗體（AE-Ab）Elisa試劑盒說明書

時間：2011/10/25閱讀：571

本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T.使用目的：本試劑盒用于測定禽血清、血漿及相關液體樣本中腦脊髓炎抗體（AE-Ab）表達。實驗原理:本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中禽腦脊髓炎抗體（AE-Ab）表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中腦脊髓炎抗體（AE-Ab）相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-抗原復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相比較，從而判定標本中禽腦脊髓炎抗體（AE-Ab）的存在與否。試劑盒組成:1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶,2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶,3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶,4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份,5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張,6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個,標本要求:1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟:1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。操作程序總結：計算和結果判定,試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15,陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為禽腦脊髓炎抗體（AE-Ab）陰性,陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為禽腦脊髓炎抗體（AE-Ab）陽性。注意事項:1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物請避光保存。6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸，使用時必須注意安全。保存條件及有效期:1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 個月。

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