脊髓性肌萎縮癥（SMA）
脊髓性肌萎縮癥（SMA），是一類由脊髓前角運動神經元變性導致肌無力、肌萎縮的疾病。由運動神經元功能基因(SMN1) 隱性突變引起，屬常染色體隱性遺傳病，臨床并不少見。主要臨床表現為進行性、對稱性，肢體近端為主的廣泛性弛緩性麻痹與肌萎縮，智力發育及感覺均正常。
SMN1基因編碼存活運動神經元（SMN）蛋白 ——一種遍布全身的蛋白質，對于運動神經元細胞的結構維持和功能至關重要。大腦和脊髓中的運動神經元控制整個身體的肌肉運動。如果沒有足夠的功能性SMN蛋白，那么運動神經元就會死亡，導致衰弱且通常致命的肌肉無力。由SMN1基因突變引起的SMA通常根據發病年齡和嚴重程度分為幾種亞型；其中嬰兒發病的SMA是嚴重和常見的亞型。患有這種疾病的兒童頭部抬頭，吞咽和呼吸都有問題。這些癥狀可能在出生時出現，也可能在6個月后出現。
近十年來，在針對SMA患者的治療策略方面取得了顯著進展：2016年12月Nusinersen反義寡核苷酸療法迅速獲得FDA批準用于所有年齡的SMA患者，可提高SMN蛋白表達并改善輕度SMA兒童和青少年的運動功能；2019年5月批準的靜脈注射表達SMN1 cDNA (scAAV9-SMN)的 重組腺相關病毒基因療法onasemnogene abeparvovec-xioi用于提高2歲及以下嬰兒的生存和運動機能。
因為SMN水平無法在活著的患者的中樞神經系統中測量，有關疾病相關的SMN表達水平變化和與疾病相關的數據很少。了解SMN在正常和患病人群、以及發展治療過程中的動態表達變化將有助于進一步優化臨床治療。
來自約翰霍普金斯大學醫學院的研究人員對臨床SMA患者進行分組，對分離的人的腦、脊髓、髂腰肌、隔膜、肝等組織中SMN mRNA和蛋白水平分別進行了量化動態檢測。其中，采用HTRF®（均相時間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）檢測技術進行不同組織的SMN蛋白定量檢測。研究發現圍產期全組織SMN蛋白水平正常下降，這支持臨床上在出生后要盡快開始SMN誘導治療；部分患者由于ASOs（反義核苷酸）在脊柱和大腦吻側區域的分布有限，可能限制了這些區域的運動單元對這些患者的臨床反應。這些結果對SMA患者的優化治療具有重要意義，并為進一步研究提高鞘內注射ASOs的生物利用度提供了依據。
文章技術路線：
HTRF定量脊髓標本中SMN蛋白的表達數據(對照組為75例;n = 16例SMA，患者年齡從15周妊娠(GA)到168個月不等)，如下圖所示：
HTRF實驗方法:
HTRF®（均相時間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）技術基于時間分辨熒光（TRF）和熒光共振能量轉移（FRET）兩大技術原理。將熒光的靈敏性、均相免洗和低背景等特點結合在一起。廣泛用于GPCRs，激酶，細胞因子，磷酸化蛋白，表觀遺傳，生物大分子（抗體）等靶點的檢測和定量。
HTRF SMN assay kit：將10 μL細胞裂解液轉移到96/384淺孔板中，加入5μL的熒光供體（Donor）和5 μL的熒光受體(Acceptor)。孵育過夜后，直接在EnVision多模式讀板儀(PerkinElmer)或其他HTRF®兼容的酶標儀上進行讀值即可。
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參考文獻
1. Ramos, Daniel M., et al. "Age-dependent SMN expression in disease-relevant tissue and implications for SMA treatment." Journal of Clinical Investigation 129.11 (2019): 4817-4831.
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