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廈門大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院夏寧邵、張?zhí)煊F(tuán)隊，與廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院李志勇團(tuán)隊、中國疾病預(yù)防控制中心黃保英團(tuán)隊聯(lián)合研究，基于VSV-SARS-CoV-2-Sdel18假病毒和ACE2過表達(dá)BHK21細(xì)胞構(gòu)建了一套穩(wěn)定的中和評價體系。本月初，該研究論文發(fā)表在預(yù)印本平臺bioRxiv上。

本研究對攜帶SARS-CoV-2全長或截短S蛋白的G蛋白缺陷型水泡性口炎病毒(VSVdG)的假病毒包裝效率以及不同細(xì)胞系用于假型病毒包裝和感染的效率進(jìn)行了評價。研究發(fā)現(xiàn)，VSV-SARS-CoV-2-Sdel18（C末端截短18個氨基酸的S蛋白）的病毒包裝和感染效率遠(yuǎn)高于VSV-SARS-CoV-2-S。而在本研究所使用的細(xì)胞系中，穩(wěn)定表達(dá)人ACE2的BHK21-hACE2對感染敏感，Vero-E6對感染也有中等程度的敏感性，BHK21細(xì)胞對假病毒幾乎不敏感。基于VSV-SARS-CoV-2-Sdel18假病毒和ACE2過表達(dá)BHK21細(xì)胞(BHK21-hACE2)，建立了抗體篩選和驗證的中和分析模型。通過對EGFP陽性的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)指征假病毒的感染情況，從而保證了高通量檢測能力。研究表明，用VSV-SARS-CoV-2-Sdel18假病毒法測定19例恢復(fù)期患者血清中和效價，與SARS-CoV-2活病毒法測定結(jié)果有較好的相關(guān)性。同時評價了7種抗SARS-CoV-2-S受體結(jié)合區(qū)(RBD)中和小鼠單克隆抗體(mAbs)的中和活性。該模型的高效性可助力針對SARS-CoV-2的新藥和疫苗研發(fā)。

Opera Phenix系統(tǒng)作為本研究中的影像學(xué)數(shù)據(jù)采集和分析的工具，保障了模型的通量和篩選效率。

不同細(xì)胞系假病毒感染效率比較。比較攜帶SARS-CoV-2 S蛋白或VSV G蛋白的VSVdG病毒在Vero-E6、BHK21、293T和BHK21-hACE2細(xì)胞系中的感染效率。

VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18在不同細(xì)胞系中的包裝效率比較。A圖左為各細(xì)胞感染VSVdG-EGFP-G 48h后的情況。A圖右顯示了由三個細(xì)胞系產(chǎn)生的病毒的不同稀釋度在BHK21-hACE2細(xì)胞中的感染能力。B圖是A圖右對應(yīng)的GFP陽性細(xì)胞計數(shù)結(jié)果。

監(jiān)測VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18感染BHK21-hACE2細(xì)胞后不同時間點的EGFP表達(dá)情況。

基于VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18的單克隆抗體的中和篩選。將35株單克隆雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清與VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18病毒共同孵育，然后將混合液加入BHK21-hACE2細(xì)胞中。通過綠色陽性的細(xì)胞數(shù)的減少情況判斷抗體的中和效果。