研究表明,通過采用SC-ICP-MS 方法,能夠測定細(xì)胞內(nèi)金屬成分、定量分析金屬及金屬摻雜藥物、納米粒子的細(xì)胞攝取率。
在本文中,我們證明了,在單個細(xì)胞基礎(chǔ)上通過PerkinElmer 的NexION®2000 單細(xì)胞ICP-MS 解決方案來量化癌細(xì)胞的金納米粒子攝取量。該技術(shù)能夠準(zhǔn)確定量出含金納米粒子(AuNP)的細(xì)胞數(shù),還能夠分析每單個癌細(xì)胞中的AuNP 數(shù),給出細(xì)胞群的攝取分布。
方法
通過表1 所示條件,在NexION 2000 ICP-MS 上運(yùn)行Syngistix 軟件下的單細(xì)胞應(yīng)用模塊,完成所有樣品分析。圖1 顯示了用于SC-ICP-MS 分析的組件,包括NexION
2000 Asperon™ 霧化室以及的單細(xì)胞進(jìn)樣微型DX自動取樣器。Asperon 霧化室旨在盡可能將細(xì)胞傳送到NexION,而單細(xì)胞微型DX 自動取樣器則在分析前攪動細(xì)胞懸濁液,以確保細(xì)胞不會從溶液中沉淀出來。
T24 癌細(xì)胞攝取量
將人類T24 膀胱癌細(xì)胞用作癌細(xì)胞模型,以量化暴露于聚乙二醇化AuNP 時的細(xì)胞納米顆粒攝取量。采用0.4nM 聚乙二醇化的AuNP,培養(yǎng)T24 癌細(xì)胞4 小時。用1xPBS 大量洗滌以去除多余的AuNP 后,用4% 多聚甲醛將T24 癌細(xì)胞固定,形成單細(xì)胞懸浮液。對于定量每個
細(xì)胞的AuNP 數(shù),SC-ICP-MS 分析結(jié)果顯示,每個細(xì)胞的AuNP 分布范圍為每個細(xì)胞攝取1 到5 個AuNP(圖5)根據(jù)圖5 所示數(shù)據(jù),合乎邏輯的下一步是,通過SC-ICP-MS,研究觀察到的納米顆粒于細(xì)胞分布的原因和潛在的生物學(xué)機(jī)制。換句話說,為什么某些細(xì)胞比其他細(xì)胞會攝取更多AuNP ?這一點很重要,因為AuNP 是很有前景的納米材料,并且越來越多用于癌癥治療的診斷和治療應(yīng)用。4,13 由于缺乏有效的分析工具,文獻(xiàn)中關(guān)于AuNP 如何與單個癌細(xì)胞相互作用的量化信息有限。通過量化單細(xì)胞(一次一個完整細(xì)胞)的細(xì)胞內(nèi)元素濃度,SC-ICP-MS(一種允許將完整的單個細(xì)胞導(dǎo)入高靈敏度ICP-MS 的技術(shù))提供了獲得這一重要信息的分析方法。
結(jié)論
在本研究中,我們通過單細(xì)胞ICP-MS 分析方法,在單個細(xì)胞水平上定量癌細(xì)胞的AuNP 攝取量。結(jié)果表明,每個細(xì)胞吸收的AuNP 分布并不均勻,特定細(xì)胞群內(nèi)的某些細(xì)胞比其他細(xì)胞明顯攝取更多AuNP。SC-ICP-MS 是一個強(qiáng)大的分析工具,可在單個細(xì)胞水平上量化元素濃度和納米粒子的分布。這項技術(shù)在單細(xì)胞基礎(chǔ)上,具有提供的納米粒子- 細(xì)胞相互作用差異新見解的潛力。
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