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乳果糖檢測不再是難題，安譜實驗助力復(fù)原乳鑒定

閱讀：1530 發(fā)布時間：2019-3-4

　生鮮乳、滅菌乳、復(fù)原乳、國產(chǎn)奶、進口奶，市面上各式各樣的乳制品已讓人眼花繚亂。消費者或許對乳制品的分類不甚了解也不太在意，然而怎么選一款好牛奶卻是大家始終關(guān)心的問題，今天我們特意來聊聊復(fù)原乳。
　A：近保健品質(zhì)量亂象頻頻被曝，感覺走親訪友還是送乳制品比較放心，但是市面上乳制品品牌眾多，我們也不太清楚如何區(qū)分哪些乳制品中添加了復(fù)原乳？
　B：NY/T 939-2016“巴氏殺菌乳和UHT滅菌乳中復(fù)原乳的鑒定”中指出可以通過乳果糖含量來判斷巴氏殺菌乳和UHT滅菌乳中是否添加復(fù)原乳。
　C：2018年2月發(fā)布的國家食品安全標準關(guān)于生乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳、和復(fù)原乳鑒定次討論稿中滅菌乳標準中乳果糖含量作為理化指標被要求；復(fù)原乳鑒定標準中完善了乳果糖測定方法中的試劑配制。
　D：那么到底如何測定乳果糖來鑒定復(fù)原乳呢？

　聚光科技（杭州）股份有限公司下屬子公司上海安譜實驗科技股份有限公司（以下簡稱“安譜實驗”）利用快速檢測試劑盒的方法對乳果糖進行檢測并提供全套解決方案和試劑耗材。
配套產(chǎn)品，一鍵采購試劑盒，解決繁瑣采購
　搭配乳果糖和D- 果糖分析物標準物質(zhì)；
　試劑盒滿足50次檢測，避免拼湊購買造成的浪費；
　提供試劑盒內(nèi)試劑的單獨購買；
方便、快捷、省時
　直接提供預(yù)配置的測試液，避免繁瑣的配制；
　試劑盒方法原理同NYT 939-2016；
　和NY/T 939-2016方法相比，試劑盒方法節(jié)省3h，完成反應(yīng)僅需2h；
　Megazyme Mega-CalcTM一鍵數(shù)據(jù)處理，準確、方便；
安譜實驗提供人性化選購、咨詢、售后等客戶體驗服務(wù)
　吸光度不穩(wěn)定、平行性不好、數(shù)據(jù)準確度不高、實驗細節(jié)把握不好，通通不是問題，安譜實驗資深技術(shù)人員手把手指導(dǎo)和解答。

檢測方法介紹

一、樣品前處理
　取某品牌市售純牛奶（記為原奶），并將其分別稀釋2倍，5倍，10倍（記為原奶*2，原奶*5，原奶*10）待取用；分別取原奶、原奶*2，原奶*5，原奶*10、和100 ppm標準品各0.5 mL于1.5 mL離心管中，加入0.2 mL磷酸鈉緩沖液、0.7 mL去離子水、0.05 mL硫酸鋅溶液、0.05 mL亞鐵氰化鉀溶液，混合均勻，在13000轉(zhuǎn)速下離心10 min，沉淀牛奶中的蛋白質(zhì)和脂肪，吸取上清液進行實驗。
注意事項：
　離心后溶液應(yīng)該為澄清的溶液，否則建議稀釋樣品或者再分別加入0.05 mL沉淀試劑：硫酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液（為避免誤差，加入沉淀劑的情況也請考慮沉淀劑對樣品的稀釋影響）；
　樣品沉淀以后應(yīng)該為澄清的溶液，取上清液時注意不要將沉淀吸入。

檢測樣品包括：

樣品	原奶		原奶*2		原奶*5		原奶*10		100ppm標品
	兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣
編號	A	B	C	D	E	F	G	H	I	J
	A空白	B空白	C空白	D空白	E空白	F空白	G空白	H空白	I空白	J空白

二、酶解實驗
　分別吸取0.5 mL的上清液于1.5 mL的離心管中（其中編號A-J為樣品，加入β-半乳糖苷酶進行酶解；A空白-J空白為空白樣，不加β-半乳糖苷酶；空白樣的目的是扣除空白）。

每個樣品分別按照以下步驟進行實驗：

添加溶液	添加體積數(shù)
添加溶液	A-J 樣品	A-J 空白
樣品前處理后的上清液	0.50 mL	0.50 mL
乙酸鈉緩沖液（0.2 M）	0.10 mL	0.10 mL
去離子水	-	0.05 mL
瓶1（β-半乳糖苷酶）	0.05 mL	-
漩渦混合，并于40℃水浴中反應(yīng)1小時，然后分別加入以下溶液，每加一個溶液，要蓋上螺帽進行漩渦混合。
TEA緩沖液（1 M）/硫酸鎂（10 mM）	0.50 mL	0.50 mL
氫氧化鈉溶液（0.33 M）	0.05 mL	0.05 mL
辛醇	0.01 mL	0.01 mL
瓶2懸浮液（葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶）	0.05 mL	0.05 mL
30%過氧化氫	0.02 mL	0.02 mL
加完后蓋上螺帽于40℃水浴中反應(yīng)15min，15min后于13000rmp離心10min，取上清液作為酶測試反應(yīng)。注意：加入過氧化氫后不管是樣品還是樣品空白會產(chǎn)生氣泡，無氣泡產(chǎn)生說明實驗可能失敗。

三、酶測試反應(yīng)

添加溶液	添加體積數(shù)
添加溶液	A-J 樣品	A-J 空白
樣品酶解實驗后的上清液	1.00mL	1.00 mL
瓶3緩沖液	0.05 mL	0.05 mL
瓶4稀釋液（NADP+/ATP)	0.05 mL	0.05 mL
將上述溶液分別加入一次性的比色皿中，每加一個溶液蓋上比色皿蓋子手動搖晃均勻，然后反應(yīng)3min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數(shù)為A₁，然后加入以下溶液進一步反應(yīng)。
瓶5懸浮液（HK/G-6-PDH)	0.02 mL	0.02 mL
瓶6懸浮液（6-PGDH)	0.02 mL	0.02 mL
每加一個溶液蓋上比色皿蓋子手動搖晃均勻，然后反應(yīng)10min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數(shù)為A₂，然后加入以下溶液進一步反應(yīng)。
瓶7懸浮液（PGI)	0.02 mL	0.02 mL
加入以上溶液手動搖晃均勻，然后反應(yīng)15min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數(shù)為A₃。注意：在檢測紫外吸光度A₁-A₃過程中，吸光度的大小會在一定范圍內(nèi)波動，波動過大或者不穩(wěn)定請排查各個實驗步驟，找出問題。

四、數(shù)據(jù)分析
　將測試的數(shù)據(jù)代入乳果糖試劑盒的Megazyme Mega-CalcTM進行計算（在Megazyme下載），得出檢測數(shù)據(jù)：

樣品	原奶		原奶*2		原奶*5		原奶*10		100ppm標品
	兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣
編號	A	B	C	D	E	F	G	H	I	J
計算終濃度（ppm）	474.6	472.2	484.8	487.4	484	499.7	493.7	500.9	97.3	101.6
平均值	473.4		486.1		491.8		497.3		99.5
結(jié)論	A3-A2＞1.5，需對樣品進行稀釋；檢測值偏低		樣品稀釋2倍，5倍，10倍后通過Megazyme Mega-CalcTM進行計算，換算為原奶含乳果糖濃度，相互比較，誤差都在2%以內(nèi)，符合檢測要求。						平行樣檢測的數(shù)值與標準樣品的濃度相符，平行樣差值低于1%。

產(chǎn)品信息

貨號	名稱	規(guī)格	價格
CFHN-K-LACTUL	乳果糖分析試劑盒	50 assays	3104
CFEQ-4-120084-0250	磷酸氫二鈉，ACS， ≥99.0%	250g	436
CFEQ-4-120023-0250	磷酸二氫鈉一水化合物，ACS，Reag. Ph. Eur.，98.0-102.0%	250g	210
CFEQ-4-198525-1000	無水硫酸鎂，≥98.0%，for analysis，粉末狀	1kg	463
CFEQ-4-198528-0500	無水乙酸鈉，(Reag. Ph. Eur.) ACS，≥99.0%	500g	490
CFEQ-4-111615-0500	三乙醇胺，≥99.0%	500ml	144
CFEQ-4-120033-0250	亞鐵氰化鉀三水合物，for analysis，98.0%	250g	353
CFEQ-4-120050-0250	硫酸鋅七水化合物，ACS，ISO， Reag.Ph Eur，≥99.0%	250g	419
CFEQ-4-120045-0500	氫氧化鈉，for analysis ，≥ 97.0%	500g	342
CFEQ-4-531046-0005	1-辛醇，≥98.0%	5mL	88
CFEQ-4-110013-0500	雙氧水（過氧化氫）， 27% w/w	500mL	275
AGEQ-2722120	CUVETTES 1.6ml 一次性UV 比色皿，半微量池、100/盒	100/盒	430
AGEQ-2722110	CUVETTES 4.0ml 一次性UV 比色皿、100/盒	100/盒	380

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